热应激肝细胞外泌体蛋白质谱分析及其促进程序性死亡作用初探

发布时间：2024-05-12 12:28

　　研究背景中暑(简称HS)是一种威胁生命的疾病,其定义为核心体温升高≥40℃,多并发严重的多器官功能障碍(MODS)。近年来,由于温室效应,中暑的发生率也逐年增加。在中暑早期就可出现不同程度的肝功能损害,且损害程度与中暑发生发展及预后密切相关,流行病学显示重症中暑合并肝衰竭时,患者的死亡率也会显著增加,甚至高达50%。目前,中暑致肝损伤的原因复杂,其机制尚未阐明。外泌体是由双层磷脂包围的囊泡状结构,直径30-200nm。外泌体内含物中包含了成千上万种生物活性分子,如蛋白质、脂质和核酸,其能将这些分子传递到受体细胞,导致其功能改变。肝源性外泌体在各种肝脏病理生理机制中扮演重要作用。外泌体蛋白或miRNA可作为肝病的新型生物标志物。人们对肝脏疾病中分泌的外泌体内含物进行了探索。来源细胞不同或者在不同刺激条件下,外泌体其内部组分的生成、装配、分泌方式及其功能具有很大的差异。此外,同细胞来源的外泌体对于不同靶细胞的影响亦存在不同。然而,关于肝细胞来源的外泌体在中暑肝损伤中的作用及蛋白质表达谱知之甚少。因此,研究中暑中肝细胞来源的外泌体的蛋白质谱变化及其在肝损伤中的功能作用可以提高我们对中暑发病机...

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图１．外泌体的特征一般鉴定

１．外泌体的特征一般鉴定。（Ａ）对照组肝细胞和热应激后复温０、３、６、９ｈ肝细细胞上清液中ＡＬＴ、ＡＳＴ、ＬＤＨ水平比较。（Ｂ）在透射电镜下观察外泌体的有圆形或椭圆形双层囊泡，直径约ｌ〇〇ｎｍ。Ｂａｒ＝?ｌＯＯｎｍ。（Ｃ）?ＮＴＡ测量外泌体的布，主要分布在３０－２００ｎｍ左右。（....

图３．２．ＧＯ功能富集分析??Ｆｉｇ．３．２Ｇｅｎｅ?Ｏｎｔｏｌｏｇｙ?ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ?ｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔ?ａｎａｌｙｓｉｓ．??

生物学调节、代谢过程、应激反应及免疫系统调节。在功能上主要分为结合功??能、分子功能、催化活性、运输活动。细胞组分上面差异蛋白主要定位于细胞、??细胞器部分以及细胞连接（图３．１）。??随后我们发现ＧＯ功能富集实验中，程序性细胞死Ｔ＇：所占比例较高（图３．２）。??表３．３我们列....

图４．１．ＫＥＧＧ通路注释．??ｌ：ｉｇ．４．１．?ＫＥＧＧ?ｐａｔｈｗａｙ?ａｎａｌｙｓｉｓ?ｏｆ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ?ｐｒｏｔｅｉｎｓ．??第二部分热应激肝细胞外泌体诱导肝损伤??

路研究的数据库，用于鉴定可能受ＨＳ－外泌体中差异蛋白质表达影响的途径。我??们发现主要的通路中包括坏死性凋亡，ＰＩ３Ｋ?（磷脂酰肌醇３＇－激酶）－Ａｋｔ信号传??导途径，抗原加工和呈递，细胞凋亡等。大多数通路与损伤和炎症有关（

图１．外泌体的直接吸收实验：共聚焦显微镜显示标记有ＰＫＨ６７的外泌体与肝细胞共同孵育??后，ＨｅｐＧ－２中出现的绿色荧光的量呈时间依赖性

获収小同时间点的细胞，在正置共聚焦显微镜下观察荧光表达强弱。在６??小时左右开始有绿色荧光表达，而且随时间延长，绿色荧光表达量也逐渐增加。??该实验表明，在体外，肝细胞可以直接摄取并内化外泌体（图１）。??３５??

本文编号：3971329