Th22、Th17细胞及其细胞因子在大鼠原位肝移植急性排斥反应模型的表达研究

发布时间：2017-06-30 17:24

  本文关键词：Th22、Th17细胞及其细胞因子在大鼠原位肝移植急性排斥反应模型的表达研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：第一部分大鼠原位肝移植急性排斥模型的建立及评价目的：掌握大鼠原位肝移植急性排斥反应的建模技术并评价其效果,总结手术技巧及方法,为后续试验建立稳定、有效的动物模型。方法：分别以清洁级纯系雄性Sprague-Dawley (SD)和Wistar大鼠为供体和受体,术前随机分为对照组(假手术组)、同系移植组(Wistar-Wistar)与异系移植组(SD-Wistar组),应用改良“二袖套法”建立大鼠原位肝移植模型36例。比较各组大鼠术后存活率及生存质量,HE染色(hematoxylin-eosin staining)观察肝脏病理变化、酶联免疫法(ELISA法)检查血清内NO含量综合评价肝移植急性排斥模型的效果。结果：①未应用任何免疫抑制剂的情况下,同系移植组大鼠共死亡1例,死因为手术出血和气胸；异系移植组大鼠术中死亡2例,均因肝下下腔静脉吻合口出血；对照组大鼠没有死亡,手术总成功率为91.7%(33/36)；同系移植组大鼠术后14天存活率为100%,生存中位数为105天,异系移植组大鼠术后生存中位数为6天；②术后第3天三组大鼠血液内NO含量差异显著。异系移植组大鼠含量最高,为(306.67±14.36pg/ml),明显高于对照组(60.77±13.66pg/ml)同系移植组含量次之,为(139.83±15.53pg/ml),低于异系移植组,但较对照组亦有明显上升(P0.05)；③对照组大鼠肝组织结构正常,未见明显炎症细胞浸润,为Williams标准0级；同系移植组大鼠肝脏组织结构完整,汇管区有较少炎症细胞浸润,肝小叶结构基本正常,为Williams标准0-1级；异系移植组大鼠肝细胞变性严重,肝血窦扩张充血明显,细胞坏死严重；汇管区及中央静脉周围出现以淋巴细胞为主的炎性细胞浸润,伴少数单核细胞,肝小叶结构紊乱,为Williams标准3级。结论：改良“二袖套法”可以简化手术术式,显著提高手术成功率,为下一步活体实验提供稳定的动物建模；在末应用任何免疫抑制剂情况下,Wistar大鼠与SD大鼠组合,可以建立稳定的急性移植排斥模型。第二部分大鼠原位肝移植急性排斥模型中Th22、Th17细胞及相关因子的表达目的：研究大鼠肝移植急性免疫排斥反应肝脏内Th22、Th17的细胞变化及其相关细胞因子白细胞介素-22、白细胞介素-17的表达,进一步探讨其与肝移植急性排斥反应发生的关系。方法：分别以清洁级纯系雄性Sprague-Dawley(SD)和Wistar大鼠为供体和受体,应用改良“二袖套法”建立大鼠原位肝移植模型。分别采用流式细胞仪方法(flow cytometry；flow cytometer；FCM)检测各组大鼠肝脏内Th22及Th17细胞数量变化；实时荧光定量逆转录一聚合酶链反应(Real time reverse transcription-Polymerise chain reactions；RT-qPCR)、蛋白质印迹法(Western blotting,WB)检测肝组织内IL-22及IL-17基因及蛋白的表达情况。结果：大鼠肝移植急性免疫排斥模型建立成功；术后第7天异系移植组大鼠肝脏内Th22、Th17细胞数量分别为(2.85±0.95)和(3.56±0.93),较同系移植组和对照组大鼠明显升高(P0.05)；肝细胞内IL-22及IL-17的基因及蛋白的表达水平均明显高于同系移植组和对照组(P0.05)。结论：Th22、Th17细胞及相关细胞因子均参与大鼠肝移植急性免疫排斥反应,在肝移植急性免疫排斥反应的发生、发展中起着不同作用,或可能成为临床诊断肝移植急性排斥反应的早期检测指标。
【关键词】：改良二袖套法 原位肝移植 急性移植排斥 一氧化氮 原位肝移植 急性移植排斥 白细胞介素-17 白细胞介素-22
【学位授予单位】：新乡医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R657.3
【目录】：

• 摘要5-8
• Abstract8-11
• 前言11-13
• 第一部分 大鼠原位肝移植急性排斥模型的建立评价13-31
• 1.材料与方法13-18
• 2.试验结果18-22
• 3.讨论22-25
• 小结25-26
• 参考文献26-29
• 附图29-31
• 第二部分 大鼠原位肝移植急性排斥模型中Th22、Th17细胞及相关因子的表达31-50
• 1.材料与方法31-39
• 2.统计学分析39
• 3.试验结果39-43
• 4.讨论43-45
• 小结45-46
• 参考文献46-50
• 全文结论50-51
• 综述51-60
• 参考文献55-60
• 附录60-61
• 攻读学位期间发表文章情况61-62
• 致谢62-63
• 个人简历63

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前5条

1 郭勇;吴存造;张启瑜;;活体肝脏移植动物模型实验研究进展[J];肝胆胰外科杂志;2010年05期

2 王小飞;张轶;张玉君;赖洁娟;杨占宇;;IL-17及IL-22在大鼠肝移植排斥反应中的表达及意义[J];免疫学杂志;2012年05期

3 杜家文,黄林平,周雷,贾振庚,潘瑞芹;雷公藤多甙对大鼠原位肝移植急性排斥反应的影响[J];中国中西医结合外科杂志;2003年02期

4 樊斌;李德卫;冯渊;杨晓波;;TNF-α和IL-2在肝移植急性排斥反应中的表达及意义[J];中国普通外科杂志;2011年01期

5 王广义,杜晓宏,孟伟,赵军,张舵;一氧化氮在大鼠肝移植急性排斥反应中的免疫学监测作用[J];中华普通外科杂志;2002年09期

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本文编号：502830