低血糖后葡萄糖再灌注性脑损伤机制的初步研究

发布时间：2017-08-07 14:19

  本文关键词：低血糖后葡萄糖再灌注性脑损伤机制的初步研究

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【摘要】：目的：低血糖后过快的升糖速度可以引起葡萄糖再灌注性脑损伤，其机制还不十分清楚，本研究旨在探讨胰岛素诱导大鼠低血糖后，不同血糖升高速度引起大鼠低血糖后葡萄糖再灌注性脑损伤的机制。 方法：采用正常雄性SD大鼠36只，其体重控制在200g-300g，我们采用简单随机抽样分组的方式将36只实验大鼠分入6个组别，即空白组，假手术组，4组实验组，每个组别均有SD大鼠6只。空白组为不经过任何处理的大鼠，假手术组使用腹腔注射胰岛素方式的同时股静脉泵注25%葡萄糖，持续血糖监测并维持大鼠血糖在5.5mmol/L上下，4组实验组先经股静脉泵注胰岛素诱导低血糖后，使用推注泵按不同的速率泵注25%的葡萄糖，依据1小时后血糖升高的不同水平将4个组别分为1.0～3.0mmol/L组、3.0～6.0mmol/L组、6.0～9.0mmol/L组和＞9.0mmol/L组。我们使用Western Blot电泳方法分析并检测4个不同组别之间凋亡蛋白Bax及Bcl-2在各自大鼠皮层及海马神经细胞上积分光密度的比值，采用BD流式细胞仪技术检测4个不同组别之间大脑皮层及海马神经细胞内Ca2+的荧光强度的变化。使用双抗体夹心Elisa方法检测大脑皮层及海马神经细胞中α酮戊二酸脱氢酶（α-KGDHC）及聚腺苷酸二磷酸核糖转移酶-1（PARP-1）在葡萄糖再灌注1小时及6小时后的含量及随时间的变化。应用SPSS18.0软件进行数据分析处理，P0.05时差异有统计学意义。 结果：（1）凋亡蛋白Bax/Bcl-2比值变化：与空白组及假手术组比较，4组实验组皮层及海马的Bax/Bcl-2比值明显升高，有显著的统计学差异（皮层：F=265.8，P0.05，海马：F=42.67，P0.05），四组实验组中＞9.0mmol/L组Bax/Bcl-2表达比值最大，1.0～3.0mmol/L组次之，与其他两组实验组之间有显著的统计学差异（皮层：F=212.1，P0.05，海马：F=27.38，P0.05），（2）钙离子荧光强度变化：与空白组及假手术组比较,4组实验组的钙离子的平均荧光强度明显升高，有显著的统计学差异（皮层：F=79.80，P0.05，海马：F=355.0，P0.05），四组实验组中＞9.0mmol/L组的钙离子平均荧光强度最大，1.0～3.0mmol/L组次之，与其他两组实验组之间有显著的统计学差异（皮层：F=50.08，，P0.05，海马：F=71.13，P0.05）。（3）α酮戊二酸脱氢酶：葡萄糖再灌注1小时后，在皮层和海马组织中，1-3mmol/L组，空白组，假手术组之间α-KGDHC浓度没有显著性的差异，其他3个实验组与空白组有显著性的差异，在皮层中，后三组实验组相互比较有显著性的差异（F=10.68，P0.05）,使用SNK-q两两比较,其中9mmol/L组α-KGDHC浓度最低。在海马中,后三组实验组之间无显著性的差异（F=1.565，P0.05）。葡萄糖再灌注6小时后，1-3mmol/L组水平降低，其他三组水平升高（除皮层的6-9mmol/L组）。（4）聚腺苷酸二磷酸核糖转移酶-1：在皮层与海马中，空白组与假手术组之间没有差异，4个实验组与空白组比较有显著性的差异，其中在皮层中，1-3mmol/L组，3-6mmol/L组之间没有显著性的差异，6-9mmol/L组次之，9mmol/L组相对其他三个实验组都有显著性差异，PARP-1的浓度是最低的，在海马组织中，1-3mmol/L组与3-6mmol/L组之间没有显著性的差异,6-9mmol/L组与9mmol/L组之间没有统计学差异，PARP-1的浓度是最低。葡萄糖再灌注6小时后，除了皮层的1-3mmol/L组，其余PARP-1浓度都有所升高。 结论：升糖速度引起低血糖葡萄糖再灌注脑损伤的机制与凋亡基因Bax及Bcl-2的表达、细胞内钙离子超载、α-KGDHC及PARP-1酶的改变有关。
【关键词】：葡萄糖再灌注性脑损伤 Bcl-2 Bax 钙离子 α酮戊二酸脱氢酶 聚腺苷酸二磷酸核糖转移酶-1
【学位授予单位】：上海交通大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R651.15
【目录】：

• 摘要6-8
• Abstract8-10
• 英文缩略语10-12
• 目录12-14
• 1 绪论14-16
• 2 材料与方法16-26
• 2.1 实验材料16-18
• 2.1.1 实验动物16
• 2.1.2 实验试剂16-17
• 2.1.3 实验器材17-18
• 2.2 主要试剂及液体的配制18-20
• 2.3 采用主要软件20-21
• 2.4 实验方法21-26
• 2.4.1 动物模型的制作与分组21-22
• 2.4.2 标本的取材22-23
• 2.4.3 Westernblot 实验过程23-24
• 2.4.4 钙离子浓度检测过程24-25
• 2.4.5 α酮戊二酸脱氢酶及聚腺苷酸二磷酸核糖转移酶-1 的检测过程25-26
• 2.4.6 统计分析26
• 3 实验结果26-42
• 3.1 Bax/Bcl-2 的结果26-30
• 3.1.1 各组皮层神经细胞中 Bax/Bcl-2 比值统计学结果27-29
• 3.1.2 各组海马神经细胞中 Bax/Bcl-2 比值比较统计学结果29-30
• 3.2 钙离子检测结果30-33
• 3.2.1 各组皮层神经细胞 Ca2+浓度统计学结果31-32
• 3.2.2 各组海马神经细胞 Ca2+浓度统计学结果32-33
• 3.3 α酮戊二酸脱氢酶及聚腺苷酸二磷酸核糖转移酶-11 小时的结果33-38
• 3.3.1 α酮戊二酸脱氢酶在皮层与海马细胞中的结果33-35
• 3.3.2 聚腺苷酸二磷酸核糖转移酶-1 的结果35-38
• 3.4 α酮戊二酸脱氢酶及聚腺苷酸二磷酸核糖转移酶-16 小时的结果38-42
• 3.4.1 α酮戊二酸脱氢酶 6 小时结果38-40
• 3.4.2 聚腺苷酸二磷酸核糖转移酶-16 小时的结果40-42
• 4 讨论42-47
• 5 结论47-48
• 参考文献48-52
• 致谢52-53
• 学术论文和科研成果目录53

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 韦艳玲;;降糖药物低血糖风险评估及其使用分析[J];临床合理用药杂志;2012年03期

2 刘建芝;赵玉武;褚秀丽;徐周伟;;大鼠低血糖后血糖升高水平对脑损伤的影响[J];中国神经免疫学和神经病学杂志;2013年05期

本文编号：635105