NSCs植入大鼠缺损皮肤后对创面及神经修复的影响

发布时间：2017-08-25 12:21

  本文关键词：NSCs植入大鼠缺损皮肤后对创面及神经修复的影响

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【摘要】：第一部分SD大鼠BMSCs诱导为NSCs的培养、鉴定 目的：体外培养、纯化、鉴定大鼠骨髓间充质干细胞（bone marrowesenchymal stem cells,BMSCs）；酸性成纤维细胞生长因子（acidicibroblast growth factor,aFGF）诱导大鼠BMSCs分化为神经干细胞neural stem cells,NSCs），观察其生物学特性并鉴定。 方法：采用全骨髓贴壁培养法培养出大鼠BMSCs，根据骨髓中各细胞的贴壁时间选取出原代BMSCs，通过细胞换液及传代培养来纯BMSCs。在高倍显微镜下查看贴壁细胞的形状及其增生方式；通过MSCs标志物对其进行鉴定。用80ng/ml aFGF诱导BMSCs分化为SCs，在高倍显微镜下观察细胞诱变过程中的形状改变。在aFGF进诱导6小时后检测NSCs的特异性标记物NSE的表达。 结果：全骨髓贴壁培养法培殖后的细胞呈贴壁、长梭形、多角形。0ng/ml aFGF诱导BMSCs分化6h后，部分细胞的胞体收缩为不规则并伴有局部胞体凸出；可检测到NSCs特异性标志物NSE。 结论：采用全骨髓贴壁培养法培养出的BMSCs在80ng/ml浓度下的aFGF进行体外诱导，从BMSCs形态学改变及特异性标记物检测对 诱导后的细胞进行鉴定，发现BMSCs可被aFGF诱导分化为NSCs。 第二部分NSCs植入大鼠缺损皮肤对创面神经修复的影响 目的：探讨aFGF体外诱导大鼠BMSCs分化为NSCs后，植入缺损皮肤对创面神经修复的作用及方式。 方法：体外获得SD大鼠BMSCs在适宜的培养条件下培养。用aFGF诱导其向NSCs分化，荧光剂DAPI标记。将81只SD大鼠背部作皮肤全层缺损创面，，随机分为局部创面注射NSCs（A）组、尾静脉注射NSCs (B)组、NSCs+血浆支架(局部外敷料，C）组、局部创面注射BMSCs（D）组、尾静脉注射BMSCs (E)组、BMSCs+血浆支架(局部外敷料组，F)组、血浆支架(局部外敷料G)组、局部创面注射等量生理盐水（H）组、尾静脉注射等量生理盐水（I）组，每组9只。创面模型在干细胞移植处理后的第4、5、7周搜集标本，并进行免疫荧光检测，RT-PCR检测皮肤神经组织特异性标记物PGP9.5的表达。 结果：PGP9.5在创面愈合后第4、5、7周的荧光密度分布，在时间上采用重复资料分析，差异有统计学意义（F=427.03，P=0.000），干细胞移植对神经修复特异性表达有差异；在分组上采用重复资料分析，差异有统计学意义（F=130.44，P=0.000），干细胞移植在时间及分组上的相互作用结果有统计学意义（F=3.543，P=0.001）。A组神经修复作用较B组明显（P=0.001），B组神经修复较C组明显（P=0.000）；A组神经修复作用较D组明显（P=0.000），D组神经修复作用较H组明显（P=0.000）；G组与H组之间有统计学意义（P=0.014），H组与I组之间无统计学意义（P=0.446）。RT-PCR检测PGP9.5基因表达的测定更进一步说明了以上结果。 结论：aFGF诱导BMSCs分化为NSCs后，通过不同移植方式将干细胞植入皮肤缺损，可促进皮肤创面神经修复；在同一种移植方式下其修复作用比BMSCs显著；同种细胞的不同移植方式时，以局部注射神经修复作用最为显著。 第三部分NSCs促进大鼠背部创面愈合的实验研究 目的：探讨NSCs植入全层皮肤缺损后对创面修复的影响。 方法：体外获得SD大鼠BMSCs，在适宜的培养条件下培养，用aFGF诱导其向NSCs分化，荧光剂DAPI标记。将27只SD大鼠背部制作皮肤缺损创面。随机分局部创面注射NSCs (A)组、局部创面注射BMSCs (B)组、局部创面注射等量生理盐水（C）组，每组9只。记录创面愈合时间；术后3、7、14天观察创面的愈合率，组织切片HE染色和VG染色观察皮肤创面炎症反应及组织胶原纤维的修复情况。 结果：干细胞移植SD大鼠体内后，A组创口闭合较快，未见出血、积脓、坏死，组织学高倍显微镜下观察，局部炎症反应轻微，创口闭合时间较B、C组时间短(p=0.000)；A组愈合率明显高于B组，B组高于C组(p=0.000)。 结论NSCs作为种子细胞，进行局部多点注射式移植皮肤创面后，可促进创面愈合，缩短创面时间，对皮肤缺损创面有修复作用。
【关键词】：全骨髓贴壁培养法 BMSCs aFGF NSCs 诱导分化 aFGF BMSCs NSCs 细胞治疗 神经再生 NSCs 皮肤创面修复 细胞治疗 aFGF
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R641
【目录】：

• 英汉缩略语名词对照5-7
• 摘要7-11
• ABSTRACT11-17
• 前言17-23
• 参考文献19-23
• 第一部分 SD 大鼠 BMSCs 诱导为 NSCs 的培养、鉴定23-28
• 1 材料和方法23-26
• 2 结果26-27
• 参考文献27-28
• 第二部分 NSCs 植入大鼠缺损皮肤对创面神经修复的影响28-42
• 1 材料和方法28-34
• 1.1 实验材料28-29
• 1.2 实验方法29-33
• 1.3 统计学分析33-34
• 2 结果34-38
• 3 讨论38-40
• 参考文献40-42
• 第三部分 NSCs 促进大鼠背部创面愈合的实验研究42-50
• 1 材料和方法42-44
• 2 结果44-47
• 3 讨论47-49
• 参考文献49-50
• 全文总结50-51
• 文献综述51-61
• 参考文献56-61
• 致谢61-62
• 攻读硕士期间发表的论文62-63

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

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本文编号：736808