芦荟多糖通过VEGFR-2介导的Ras信号通路调控血管内皮细胞增殖及促进创面愈合的作用机制

发布时间：2017-09-05 11:00

  本文关键词：芦荟多糖通过VEGFR-2介导的Ras信号通路调控血管内皮细胞增殖及促进创面愈合的作用机制

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【摘要】：目的:探讨芦荟多糖通过VEGFR-2介导Ras信号通路调控血管内皮细胞增殖以及促进小鼠深Ⅱ度创面愈合的作用机制。方法:1体外培养人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)随机分为两组-芦荟多糖组和对照组,芦荟多糖组为HUVEC分别经100,200和400mg/L浓度芦荟多糖作用,未经芦荟多糖作用为对照组。MTT法检测各组细胞增殖状况,倒置显微镜观察细胞形态学改变;流式细胞技术检测细胞周期;AO-EB染色法检测芦荟多糖对细胞毒副作用;LDH漏出率检测芦荟多糖对细胞损伤程度。2芦荟多糖组和对照组HUVECs进行逐级信号阻断:⑴加入SU5416半数抑制剂量(IC50)阻断VEGFR-2;⑵加入U73122完全阻断PLC-γ后,用FPP IC50阻断Ras;⑶以不加抑制剂作为抑制剂对照组。MTT法检测各组细胞增殖状况,ELISA法检测培养上清液中VEGF和VEGFR-2水平,Western Blot法检测细胞中VEGFR-2、Ras、Raf以及Ras和Raf磷酸化蛋白的表达。3 150只C57BL/6雄性小鼠随机分为对照组(n=6)和实验组(n=144),实验组小鼠于背部制作直径2cm深Ⅱ度烫伤模型,并随机细分为四个处理组(每个处理组36只),创面分别用0.5%芦荟多糖霜、SD-Ag霜、基质霜和生理盐水处理,观察创面愈合情况,并于伤后1,3,7,10,14和21d取创面组织,应用ELISA法检测VEGF和VEGFR-2水平。结果:1 MTT检测结果显示芦荟多糖作用后HUVEC增殖与对照组比较均较为活跃,并于第5天达峰值;倒置相差显微镜观察细胞形态无明显改变;芦荟多糖作用后G0/G1期细胞所占百分率显著下降,而G2/M期和S期细胞所占百分率显著上升(P0.01);AO-EB染色结果未发现凋亡或死亡细胞;各组LDH漏出率也无明显改变。2⑴与对照组比较,200和400mg/L芦荟多糖组培养上清液中VEGF水平显著上升(P0.05-0.01),细胞Ras磷酸化蛋白表达明显增强(P0.05);100,200和400mg/L芦荟多糖组VEGFR、Ras和Raf蛋白表达也明显增强(P0.05-0.01)。⑵与不加抑制剂的芦荟多糖组和对照组比较,加入IC50 SU5416作用48h后相对应各组HUVEC增殖明显下降,培养上清液中VEGF水平显著上升(P0.05-0.01),细胞VEGFR-2、Ras和Ras磷酸化蛋白表达均显著下降(P0.05-0.01);但与抑制剂对照组比较,200和400mg/L芦荟多糖组细胞增殖明显上升(P0.01);100,200和400mg/L芦荟多糖组培养上清液中VEGF水平显著上升(P0.05),而VEGFR-2水平只有200mg/L芦荟多糖组差异具有显著性意义(P0.05);100,200和400mg/L芦荟多糖组细胞VEGFR-2蛋白表达明显增强(P0.05-0.01),200和400mg/L芦荟多糖组细胞Ras和Ras磷酸化蛋白表达明显增强(P0.05)。⑶与不加抑制剂的芦荟多糖组和对照组比较,加入IC50 FPP作用48h后相对应各组细胞增殖明显下降(P0.01),细胞Ras、Raf及其磷酸化蛋白表达均显著下降(P0.05-0.01);但与抑制剂对照组比较,200和400mg/L芦荟多糖组细胞增殖明显上升(P0.01);100,200和400mg/L芦荟多糖组细胞Ras、和Raf蛋白表达明显增强(P0.01),它们磷酸化蛋白呈上升趋势。3与SD-Ag组、基质组和生理盐水组比较,芦荟多糖组伤后10、14和21d创面愈合明显增快(P0.05)。芦荟多糖组伤后1、3、7和21d创面组织中VEGF水平与生理盐水组比较显著增加(P0.05-0.01);而与SD-Ag组和基质组比较,芦荟多糖组伤后3、7和21d创面组织中VEGF水平也显著性上升(P0.05-0.01)。芦荟多糖组伤后7、10、14和21d创面组织中VEGFR-2水平与生理盐水组比较显著增加,而与SD-Ag组和基质组比较,芦荟多糖组伤后14和21d创面组织中VEGFR-2水平呈显著性增加(P0.05-0.01)。结论:芦荟多糖能促进血管内皮细胞增殖,且无毒性,它促进血管内皮细胞分泌VEGF,并增强由VEGFR-2介导Ras信号通路中VEGFR-2、Ras、Raf和Ras磷酸化蛋白表达,从而促进血管内皮细胞增殖。动物实验证实芦荟多糖促进深Ⅱ度烫伤小鼠创面组织产生VEGF,并能增强创面组织中VEGFR-2表达,加速创面愈合。本研究结果表明芦荟多糖在由VEGFR-2介导Ras信号通路调控血管内皮细胞增殖的创面愈合过程中起重要作用。
【关键词】：芦荟多糖 VEGFR-2 信号通路 Ras 创面愈合
【学位授予单位】：福建医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R285.5
【目录】：

• 英文缩略词表（4-5
• 中文摘要5-8
• 英文摘要8-12
• 前言12-15
• 第一部分 芦荟多糖对体外培养人脐静脉血管内皮细胞增殖的影响材料与方法15-26
• 材料与方法15-19
• 结果19-23
• 讨论23-25
• 小结25-26
• 第二部分 芦荟多糖通过VEGFR-2 介导Ras信号通路调控人脐静脉血管内皮细胞增殖的作用机制材料与方法26-40
• 材料与方法26-31
• 结果31-36
• 讨论36-39
• 小结39-40
• 第三部分 芦荟多糖对小鼠深Ⅱ度烫伤创面组织中VEGF与VEGFR-2 的影响及其作用机制材料与方法40-48
• 材料与方法40-42
• 结果42-46
• 讨论46-47
• 小结47-48
• 结论48-49
• 参考文献49-53
• 综述53-62
• 参考文献58-62
• 致谢62

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前8条

1 王建华,尹庆水,黄清春,吴岳嵩;血管内皮生长因子促血管形成作用及其调控[J];第二军医大学学报;2004年02期

2 刀吉玫;陈千益;;血管内皮细胞生长因子在损伤修复中的作用[J];大理学院学报;2007年S1期

3 陈晓东;江琼;;芦荟多糖对人成纤维细胞体外分泌转化生长因子-β_1的影响[J];海峡药学;2011年10期

4 陈晓东;江琼;王顺宾;陈昭宏;;芦荟提取物对烫伤大鼠深Ⅱ度创面组织中透明质酸的影响[J];海峡药学;2013年11期

5 刘玲英;陈晓东;吴伯瑜;江琼;;芦荟多糖对体外培养人成纤维细胞增殖和分泌透明质酸与羟脯氨酸的影响[J];中西医结合学报;2010年03期

6 郑军,黄晓元,韦星;表皮生长因子对大鼠深Ⅱ度烧伤创面愈合的影响[J];中华烧伤杂志;2003年05期

7 吕瑞林;吴伯瑜;陈晓东;江琼;;芦荟提取物对烫伤大鼠创面组织一氧化氮及内皮素含量的影响[J];中华烧伤杂志;2006年05期

8 Amirhossein Ahmadi;;Potential Prevention:Aloe Vera Mouthwash May Reduce Radiation-Induced Oral Mucositis in Head and Neck Cancer Patients[J];Chinese Journal of Integrative Medicine;2012年08期

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本文编号：797562