携带Livin基因的骨髓间充质干细胞移植治疗对急性心肌梗死大鼠心功能的影响

发布时间：2017-09-06 20:39

  本文关键词：携带Livin基因的骨髓间充质干细胞移植治疗对急性心肌梗死大鼠心功能的影响

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【摘要】：目的: 研究携带Livin基因的重组腺病毒感染后骨髓间充质干细胞移植对急性心肌梗死大鼠心功能的影响以及livin和促凋亡蛋白caspase-3、caspase-7、caspase-9在感染前后细胞中的表达水平的变化。 方法： （1）通过全骨髓培养法分离培养骨髓间充质干细胞，，用流式细胞仪鉴定其表面分子标记物CD29、34、45和90的表达。转染携带Livin基因的重组腺病毒后用流式检测其对MSCs凋亡的影响。 （2）通过Western blot印迹法分别检测Livin、capase3、caspase-7、caspase-9的蛋白表达情况 （3）采用冠状动脉左前降支结扎法建立心肌梗死模型，然后实验分四组进行：A组：注射无胎牛血清的DMEM组(100uL)；B组注射MSCs组(100uL，约l×106个细胞)；C组：注射rAd-control/MSCs组(100uL，约l×106个细胞)；D组：注射rAd-livin/MSCs组(100ul，约1×106个细胞)，各组细胞注射之前都需进行DAPI染色。 （4）采用生理仪记录各组大鼠左室收缩压(LVSP)、左室舒张压(LVDP)、左室内压最大上升速率(+dp/dtmax)、左室最内压最大下降速率(-dp/dtmax)来评价大鼠心功能，记录后取出大鼠心脏行冰冻切片，荧光显微镜下观察的DAPI染色细胞的数量。 结果： （1） rAd-livin感染MSCs后其凋亡率与正常组和空载组相比都显著降低（P 0.05），促凋亡蛋白caspase-3、caspase-7或caspase-9在细胞中的表达水平下降（P 0.05）； （2）急性心肌梗死大鼠随机分四组注射无血清的DMEM、MSCs、rAd-control/MSCs、 rAd-livin/MSCs后， MSCs、 rAd-control/MSCs、rAd-livin/MSCs组心功能较DMEM组有显著改善（P0.05），而MSCs、rAd-control/MSCs、rAd-livin/MSCs三组之间无显著差异（P0.05），但rAd-livin/MSCs组心功能改善更明显，且移植后存活的干细胞数量显著多于其它两组（P0.05）。 结论： （1） rAd-livin感染MSCs后降低MSCs凋亡率，并且降低促凋亡蛋白caspase-3、caspase-7或caspase-9在细胞中的表达水平； （2）rAd-livin/MSCs移植可进一步改善心肌梗死大鼠心功能
【关键词】：基因 骨髓间充质干细胞 心肌梗死 心功能
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R542.22
【目录】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-9
• 中英缩略词表9-11
• 第1章 引言11-13
• 第2章 材料与方法13-21
• 2.1 材料13-15
• 2.1.1 主要使用仪器13
• 2.1.2 主要购买试剂13-14
• 2.1.3 试剂配制14-15
• 2.2 方法15-20
• 2.2.1 大鼠骨髓 MSCs 的分离培养和扩增15-16
• 2.2.2 MSCs 的流式细胞仪鉴定16
• 2.2.3 rAd-livin 对 MSCs 感染率的测定16-17
• 2.2.4 流式细胞术检测 rAd-livin 感染对 MSCs 凋亡的影响17
• 2.2.5 Western blot 检测抗凋亡蛋白 Livin 及促凋亡蛋白 caspase-3、caspase-7、caspase-9 在细胞中的表达水平17-19
• 2.2.6 大鼠心肌梗死模型的制备及分组:19-20
• 2.2.7 左心室功能的测定：20
• 2.2.8 条带灰度值分析20
• 2.3 数据处理和统计学分析20-21
• 第3章 结果21-27
• 3.1 骨髓间充质干细胞的分离培养及流式鉴定结果21-22
• 3.1.1 骨髓间充质干细胞的分离培养21
• 3.1.2 流式鉴定结果：细胞表面标记物的表达21-22
• 3.2 转染后细胞凋亡率变化22-23
• 3.3 细胞转染情况23-24
• 3.4 转染后 Livin、caspase3、caspase7 和 caspase9 蛋白的表达24-25
• 3.5 大鼠心肌梗死模型的建立25
• 3.6 心功能测定结果25-26
• 3.7 心肌冰冻切片染色结果26-27
• 第4章 讨论27-32
• 4.1 骨髓间充质干细胞的分离培养及纯化27-28
• 4.2 骨髓间充质干细胞的鉴定28-29
• 4.3 骨髓间充质干细胞移植改善心功能的作用机制29-30
• 4.4 基因修饰的干细胞应用前景30
• 4.5 Livin 抗凋亡的作用机制30-32
• 第5章 结论与展望32-33
• 5.1 结论32
• 5.2 仍需进一步研究之处与展望32-33
• 致谢33-34
• 参考文献34-38
• 攻读学位期间的研究成果38-39
• 综述39-45
• 参考文献42-45

【参考文献】

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1 陈波,曾秋棠,郎明健,关思虞;血管内皮生长因子基因转染骨髓间充质干细胞同种异体移植治疗大鼠急性心肌梗死[J];基础医学与临床;2005年06期

本文编号：805315