饱和氢气生理盐水对吸入性肺损伤的保护作用

发布时间：2017-09-24 23:09

  本文关键词：饱和氢气生理盐水对吸入性肺损伤的保护作用

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【摘要】：目的：探讨不同剂量氢气饱和生理盐水(hydrogen-rich saline, HS)对烟雾吸入性损伤大鼠急性肺损伤(acute lung injury, ALI)的保护作用。 方法：将30只成年清洁级雄性SD大鼠随机分为5组：空白对照组(C)、吸入性损伤组(Ⅰ)、氢气饱和生理盐水组(HS)其中包括：氢气饱和生理盐水低剂量组(2.5ml/kg, HSL)、氢气饱和生理盐水中剂量组(5ml/kg, HSM)、氢气饱和生理盐水高剂量组(10ml/kg, HSH)。空白对照组不做任何处理,吸入性损伤组造成吸入性损伤模型后不做处理,氢气饱和生理盐水组造成吸入性损伤模型后给予腹腔注射富氢水治疗(3组的注射剂量分别为2.5ml/kg、5ml/kg、10ml/kg)。各组于致伤后24h后腹主动脉取血2ml,处死。动脉血离心后检测血清中肿瘤坏死因子a (tumor necrosis factor α, TNF-α);取右肺组织做成病理切片,光镜及透射电镜下观察肺组织病理学变化。取左肺组织匀浆检测组织中丙二醛(malondialdehyde, MDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)活性；免疫组织化学法测定肺组织核因子-KBp65(nuclear factor-KB, NF-KBp65)的表达；TUNEL法检测肺组织凋亡情况。 结果：①光镜下：空白组大鼠肺泡腔结构完整,壁光滑,肺泡隔均匀一致,未见水肿,肺泡腔清晰,其内无渗出液或渗出的白细胞；吸入性损伤组表现为肺泡间隔明显增厚、水肿,肺泡间质小血管充血,管腔内中性粒细胞积聚、微血栓形成。肺泡扩张或萎陷,肺泡组织结构难以辨清,肺泡腔内和小气道内有大量红细胞及炎性细胞浸润；中、高剂量氢气生理盐水组肺组织水肿减轻,浸润的白细胞数量减少,肺泡扩张和萎陷程度有所改善,而低剂量组改善不明显。②电镜下：空白对照组肺泡清亮,血管畅通,Ⅰ型上皮细胞(alveolartype Ⅰ cells, AT-Ⅰ)正常,肺泡Ⅱ型上皮细胞((alveolartype Ⅱ cells, AT-Ⅱ)结构正常,粗面内质网带状,附着核糖体丰富,胞质内板层小体堆积,肺泡表面活性物质(pulmonary surfactant, PS)小泡丰富。毛细血管内皮细胞基本正常。呼吸膜结构正常；吸入性损伤组肺泡腔内有红细胞、细胞碎片,肺泡毛细血管充血。肺泡上皮细胞微绒毛脱落,有的上皮细胞坏死、脱落。呼吸膜肿胀增厚。血管皱曲,红细胞瘀滞,粘附于血管内壁。有大量髓鳞体样结构产生。Ⅰ型上皮细胞核周池扩张,核染色质电子密度减低,粗面内质网池扩张,伴有脱颗粒,线粒体结构部清晰。Ⅱ型肺泡上皮细胞结构松散,细胞表面有少量微绒毛或无微绒毛,有的可见微绒毛的脱落,胞浆内板层小体结构较少,线粒体基质深、模糊、嵴不清楚,少数线粒体有空泡变,粗面内质网扩张,所含表面活性物质大部分排出。部分毛细血管内皮细胞肿胀,凸向血管腔；HSL组较Ⅰ组变化不大；HSM、HSH组电镜下病理改变较Ⅰ组明显减轻,且HSH组较HSM组效果明显。③血清TNF-α含量对比：HSM、HSH组TNF-α含量较Ⅰ组降低(P0.05),且HSH组TNF-α较HSM组降低明显(P0.05),HSL组与Ⅰ组间差异无统计学意义(P0.05)。④肺组织SOD、MDA活性对比：HSM、HSH组SOD含量高于Ⅰ组(P0.05),且HSH组高于HSM组,差异有统计学意义(P0.05),HSL组与Ⅰ组差异不明显(P0.05)。HSM、HSH组MDA水平低于Ⅰ组(P0.05),且HSH组低于HSM组,差异有统计学意义(P0.05),HSL组与Ⅰ组差异无统计学意义(P0.05)。⑤肺组织细胞NF-κB表达程度的对比：空白对照组大鼠肺组织内存在散在的NF-κB阳性染色细胞,主要位于胞浆(对照组NF-KBp65不表达或表达极弱)。吸入性损伤组有深染的NF-κB阳性细胞,其染色以细胞核为主。而氢气饱和生理盐水各组细胞核及胞浆NF-κB染色普遍淡于Ⅰ组,以HSM、HSH为著,HSL变化不大。各组平均光密度值(MOD)统计结果显示与上述表述致,且HSH组MOD值低于HSM组(P0.05)。⑥肺组织凋亡情况对比：TUNEL染色结果显示,空白组有少许细胞被染成棕色,吸入性损伤组可见大量被染成棕色的阳性细胞,然而HSm、HSH组阳性细胞较吸入性损伤组明显减少,HSL组变化不明显。各组凋亡指数(AI)统计结果显示与上述表述一致,HSH组低于HSM组(P0.05) 结论：本实验中、高剂量氢气饱和生理盐水(5ml/kg、10ml/kg)通过影响细胞炎症反应、氧化应激及凋亡方面减轻吸入性损伤大鼠的急性肺损伤,且高剂量组(10ml/kg)较中剂量组(5ml/kg)效果更好,而低剂量组(2.5ml/kg)治疗效果不明显。
【关键词】：吸入性损伤 急性肺损伤 氢气饱和生理盐水 透射电镜 TUNEL
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R644
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 缩略语/符号说明10-11
• 前言11-14
• 研究现状、成果11-13
• 研究目的、方法13-14
• 1.1 对象和方法14-25
• 1.1.1 实验动物14
• 1.1.2 实验试剂14
• 1.1.3 实验仪器14-15
• 1.1.4 吸入性损伤模型的制备15
• 1.1.5 氢气饱和生理盐水的制备15-16
• 1.1.6 实验方法16-24
• 1.1.7 统计学分析24-25
• 1.2 结果25-31
• 1.2.1 肺组织病理结构观察25-26
• 1.2.2 各组大鼠血清TNF-α含量的比较26-27
• 1.2.3 各组大鼠肺组织MDA、SOD的比较27-28
• 1.2.4 各组大鼠肺组织细胞NF-κB活性的比较28-29
• 1.2.5 各组大鼠肺组织细胞凋亡情况的比较29-31
• 1.3 讨论31-36
• 1.3.1 大鼠烟雾吸入性损伤实验模型的致伤效果评估31
• 1.3.2 吸入性肺损伤时肺组织电镜下超微结构改变及其病理生理变化31-32
• 1.3.3 氢气的选择性抗氧化作用32-33
• 1.3.4 氢气的抗炎作用33-34
• 1.3.5 氢气的抗凋亡作用34-36
• 结论36-37
• 参考文献37-42
• 发表文献和参加科研情况说明42-43
• 附录43-47
• 综述 氢气对肺损伤的保护效应及相关机制47-63
• 综述参考文献56-63
• 致谢63

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

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本文编号：913980