REG3A诱导SHP-1调节非感染伤口TLR3-依赖型炎症发生的功能机制

发布时间：2017-09-29 23:34

  本文关键词：REG3A诱导SHP-1调节非感染伤口TLR3-依赖型炎症发生的功能机制

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【摘要】：伤口愈合是机体维持稳态的一个不可或缺的生理过程,其中炎症期对于伤口愈合过程至关重要。适度的炎症反应有助于清除细菌和细胞碎片,促进组织修复,而过度的炎症反应会导致伤口的难以愈合、组织坏死甚至多器官衰竭。长久以来科学家们研究的热点集中在微生物感染导致的炎症反应,而忽略了非微生物感染引发的过度炎症带来的危害。因此,对非感染伤口炎症机制的探究迫在眉睫。REG3A是一种多功能蛋白,虽然能够抑制胰腺炎、肠炎和角膜炎等炎症反应的发生,但对皮肤炎症的调节作用尚未有报道,其机制的研究更是空白。本课题首次发现除了已知的MyD88信号通路外,非依赖于接头分子MyD88的TLR3信号通路也能介导REG3A的表达,较于野生型小鼠伤口,TLR3基因敲除小鼠非感染伤口皮肤中RegⅢγ表达明显降低,并且在原代角质形成细胞中沉默TLR3受体后,poly(I:C)诱导的REG3A也明显变少。此外,小鼠背部皮间注射重组蛋白RegⅢγ后能够抑制非感染伤口TLR3依赖性炎症因子的产生,重组蛋白REG3A在原代角质形成细胞中也能够抑制poly(I:C)诱导的炎症因子的表达,表明REG3A对非感染伤口炎症的负调节功能。揭示了机体中存在的一种“稳态”机制,即TLR3的激活促进炎症反应的同时还会诱导抗炎蛋白REG3A的表达,防止过度炎症的发生。随后,我们详尽的探究了REG3A的抗炎机制。首先我们纯化得到不同结构域的REG3A蛋白与poly(I:C)共刺激角质形成细胞,发现REG3A的CTLD (C类凝集素结构域)是其发挥抗炎功能的主要片段。在角质形成细胞中通过抑制剂筛选发现TLR3主要通过激活JNK信号通路诱导炎症因子的产生,而REG3A正是通过抑制TLR3介导的JNK2的磷酸化从而发挥抗炎功能,小鼠在体实验也证明了这一点。为了进一步证明REG3A是如何发挥去磷酸化功能的,我们对REG3A刺激角质形成细胞样品进行检测,发现REG3A并不能诱导TLR下游负调节子A20、SARM或TRAF1的表达,却能够诱导负调节子SHP-1转录水平和蛋白水平的表达,并且小鼠背部皮间注射RegⅢγ也发现能够时间依赖性诱导SHP-1的表达。而REG3A主要是通过结合其受体EXTL3 (1-141aa)激活AKT-STAT3信号通路,从而诱导角质形成细胞中负调节子SHP-1的表达。将SHP-1基因沉默后,REG3A将不能够使JNK2去磷酸化及抑制TLR3介导的炎症反应,表明REG3A是通过诱导SHP-1的表达使TLR3介导的JNK2去磷酸化从而抑制炎症反应的产生。综上所述,我们的研究首次发现了TLR3信号通路的激活能够介导REG3A的表达,并且REG3A能够通过诱导负调节子SHP-1使JNK2去磷酸化从而抑制非感染伤口TLR3-依赖型炎症的过表达,详尽的证明了其中的调控机制,为防止非感染伤口的发炎提供了一种非抗生素治疗的新方法。
【关键词】：胰再生源蛋白3A EXTL3 SHP-1 炎症
【学位授予单位】：华东师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R641
【目录】：

• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-12
• 第一章 综述12-28
• 1. 皮肤伤口愈合过程12-15
• 1.1 皮肤的组成结构12-13
• 1.2 伤口愈合过程13-15
• 2. TLR与伤口炎症反应15-20
• 2.1 Toll样受体(TLR)15-17
• 2.2 角质形成细胞中TLR介导的炎症反应17-20
• 3. 胰再生源蛋白3A(REG3A)20-26
• 3.1 Reg蛋白与受体20-21
• 3.2 Reg蛋白的功能21-24
• 3.3 Reg蛋白的表达调节24-26
• 4. 负调节子SHP-1在炎症反应中的调节作用26-28
• 第二章 REG3A诱导SHP-1调节TLR3依赖性炎症的发生的功能机制28-83
• 一、引言28-29
• 二、实验材料29-35
• 三、实验方法35-50
• 四、结果与分析50-80
• 1. Tlr3介导皮肤伤口处RegⅢγ表达50-51
• 2. TLR3介导皮肤角质形成细胞中REG3A表达51-52
• 3. RegⅢγ抑制小鼠皮肤伤口Tlr3介导的炎症因子表达52-53
• 4. RegⅢγ抑制小鼠皮肤伤口炎性细胞的浸润53-54
• 5. REG3A在角质形成细胞中抑制poly(I：C)诱导的炎症应答54-55
• 6. REG3A通过CTLD抑制poly(I：C)诱导的炎症因子的表达55-56
• 7. REG3A通过其CTLD抑制poly(I：C)诱导的趋化因子的表达56-57
• 8. poly(I：C)在角质形成细胞中通过激活JNK2诱导炎症应答57-59
• 9. TLR3通过JNK2信号通路介导皮肤伤口处炎症因子表达59-60
• 10. REG3A通过阻断JNK pathway抑制poly(I：C)诱导的炎症因子表达60-63
• 11. REG3A在角质形成细胞中不诱导TRAF1、SARM及A20的表达63-64
• 12. REG3A在角质形成细胞中诱导负调节子SHP-1的表达64-65
• 13. C-REG3A在角质形成细胞中诱导负调节子SHP-1的表达65-66
• 14. RegⅢγ体内诱导负调节子SHP-1蛋白水平表达66-67
• 15. 体外超表达SHP-1能抑制poly(I：C)诱导的炎症应答67-68
• 16. REG3A抑制poly(I：C)诱导的炎症应答依赖于SHP-168-69
• 17. REG3A与受体EXTL3氮端(1-141aa)相互作用69-70
• 18. REG3A通过CTLD与受体EXTL3氮端(1-141aa)相互作用70-71
• 19. REG3A通过EXTL3诱导SHP-1抑制poly(I：C)诱导的炎症应答71-72
• 20. REG3A通过STAT3及AKT信号通路诱导SHP-1表达72-74
• 21. REG3A通过AKT-STAT3信号通路诱导SHP-1表达74
• 22. SHP-1功能缺陷突变质粒的构建74-75
• 23. REG3A通过诱导SHP-1抑制poly(I：C)诱导的JNK2的磷酸化75-77
• 24. REG3A诱导SHP-1能与JNK2相互作用77-78
• 25. JNK2不依赖于其磷酸化位点与SHP-1相互结合78-80
• 五、讨论80-83
• 第三章 总结83-86
• 参考文献86-90
• 附录90-91
• 硕士期间发表研究论文91-92
• 致谢92-93

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