Bcl-2、Caspase-3在Aβ1-42寡聚体诱导的AD模型大鼠皮质、海马区神经元损伤中的作用

发布时间：2017-10-09 21:01

  本文关键词：Bcl-2、Caspase-3在Aβ1-42寡聚体诱导的AD模型大鼠皮质、海马区神经元损伤中的作用

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【摘要】：目的：探讨Bcl-2、Caspase-3在Aβ1-42寡聚体侧脑室给药诱导的AD模型大鼠皮质、海马区神经元损伤中的作用。方法：利用Morris水迷宫实验筛选出逃避潜伏期少于60s的雄性SD大鼠60只随机等分为四组（每组15只）：正常组、PBS对照组、Aβ1-42纤维组、Aβ1-42寡聚体组。参照《脑立体定位图谱》，利用脑立体定位仪定位大鼠右侧脑室，把微量给药系统固定于右侧脑室，通过微量给药系统将Aβ1-42纤维体（浓度为1μg/μl）或Aβ1-42寡聚体（浓度为1μg/μl）注射于大鼠右侧脑室，每天给药5μg，连续给药5天，制备AD模型；PBS对照组采用同样的方法给予等体积的PBS；正常组不做任何处理。给药结束后第四周，通过采用Morris水迷宫定位航行实验对大鼠学习、记忆能力进行检测。行为学检测完毕后，每组随机选取4只大鼠做心脏灌注，用玻璃分针剥离脑组织，取材、石蜡包埋，制作切片。剩余大鼠眼球摘除放血处死，冰盘上快速分离大鼠的皮质、海马，置于-80℃保存备用。采用RT-PCR法检测大鼠皮质、海马区的Bcl-2mRNA、Caspase-3mRNA的表达；利用Western blot法检测大鼠皮质、海马区的Bcl-2蛋白相对表达水平以及Caspase-3蛋白活性；HE染色，利用光学显微镜观察大鼠皮质、海马的形态学变化。采用SPSS19.0统计软件对数据进行统计分析，实验结果以x±S表示，P0.05表示差异有统计学意义。结果：（1）Morris水迷宫行为学检测：造模前，四组大鼠的逃避潜伏期无显著性差异（P0.05）。造模后，Aβ1-42寡聚体组、Aβ1-42纤维组大鼠的逃避潜伏期与造模前相比均延长（P0.05）；而正常组、PBS对照组大鼠的逃避潜伏期造模前后比较无统计学意义（P0.05）；造模后的Aβ1-42寡聚体组（49.200±7.517）、Aβ1-42纤维组（37.200±5.937）大鼠的逃避潜伏期长于正常组（26.200±3.985）及PBS对照组（28.000±7.906），比较具有统计学意义（P0.05）；与Aβ1-42纤维组比较，Aβ1-42寡聚体组大鼠的逃避潜伏期明显延长(P0.05)。（2）Bcl-2mRNA、Caspase-3mRNA检测结果：与正常组以及PBS对照组比较，Aβ1-42寡聚体组及Aβ1-42纤维组的大鼠皮质、海马区的Bcl-2mRNA表达均下调（P0.05）,其中，Aβ1-42寡聚体组大鼠的皮质、海马区的Bcl-2mRNA表达下降得更显著（P0.05）；与正常组相比，Caspase-3mRNA在Aβ1-42寡聚体组以及Aβ1-42纤维组大鼠的皮质、海马区的表达均增强（P0.05）,以Aβ1-42寡聚体组的大鼠皮质、海马区的Caspase-3mRNA上调更明显（P0.05）；PBS对照组大鼠的皮质、海马区的Bcl-2mRNA、Caspase-3mRNA与正常组相比无统计意义（P0.05）。（3）Bcl-2、Caspase-3蛋白检测：Western blot结果显示，与正常组及PBS对照组比较，在Aβ1-42寡聚体组和Aβ1-42纤维组大鼠的皮质、海马中，Bcl-2蛋白的相对表达水平降低（P0.05），Caspase-3蛋白活性增强（P0.05），差异具有统计学意义，其中Aβ1-42寡聚体组的变化更显著；PBS对照组大鼠皮质、海马区的Bcl-2蛋白表达水平以及Caspase-3蛋白活性与正常组比较无显著差异（P0.05）。（4）由HE染色结果可知，正常组和PBS对照组大鼠的大脑皮质神经元细胞核呈蓝色，核仁明显，胞浆丰富；Aβ1-42纤维组大鼠的皮质神经元细胞核染色加深，核膜结构不清；Aβ1-42寡聚体组大鼠皮质神经元的损伤更严重，细胞核染色为黑紫色，胞质致密，核染色质边集，核固缩。正常组和PBS对照组大鼠的海马神经元数目较多，细胞核呈椭圆形或圆形，染色为浅蓝色，着色均匀，核仁明显。Aβ1-42纤维组大鼠的海马神经元核染色比正常组深染，，形态不规则；Aβ1-42寡聚体组大鼠的海马神经元排列紊乱，胞体缩小，核染色为深蓝紫色，核染色质浓缩致密浓染。结论：（1）将Aβ1-42少量多次地灌注于大鼠侧脑室的造模方法，能成功地制备较为理想的AD动物模型。（2）Aβ1-42寡聚体和Aβ1-42纤维体均可导致大鼠认知功能障碍，其中，Aβ1-42寡聚体能更严重地影响大鼠大脑的学习记忆功能。（3）Aβ1-42寡聚体和Aβ1-42纤维体可抑制大鼠大脑皮质、海马区的Bcl-2表达，上调Caspase-3的表达，增强Caspase-3活性，（4）Aβ1-42寡聚体、Aβ1-42纤维体均可损伤大鼠大脑皮质、海马区的神经元，其中，Aβ1-42寡聚体对神经元的毒性更大。（5）Bcl-2、Caspase-3在Aβ1-42寡聚体诱导大鼠的神经元损伤中发挥重要的作用，其作用机制值得进行深入研究。
【关键词】：阿尔茨海默病 Aβ1-42寡聚体 Aβ1-42纤维体 Bcl-2 Caspase-3 细胞凋亡
【学位授予单位】：桂林医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R749.16
【目录】：

• 中文摘要5-8
• ABSTRACT8-13
• 英汉缩略词对照表13-14
• 前言14-16
• 1 阿尔茨海默病（Alzheimer’s Disease,AD）的研究背景14
• 2 阿尔茨海默病的临床表现及病理变化14-15
• 3 Aβ与阿尔茨海默病15-16
• 1 材料与方法16-41
• 1.1 实验材料与仪器16-24
• 1.2 实验方法24-41
• 1.3 统计学处理41
• 2 结果41-49
• 2.1 模型建立及行为学变化41-44
• 2.2 RT-PCR 结果44-46
• 2.3 Western blot 结果46-47
• 2.4 HE 染色光镜观察结果47-49
• 3 讨论49-55
• 3.1 AD 大鼠模型的建立方法49-50
• 3.2 Aβ1-42 寡聚体神经毒性对学习记忆能力的影响50-52
• 3.3 Bcl-2、Caspase-3 在 Aβ1-42 寡聚体诱导神经元损伤中的作用52-55
• 4 结论55
• 参考文献55-60
• 综述60-70
• 参考文献66-70
• 攻读学位期间发表的学术论文目录70-71
• 致谢71-72

本文编号：1002370