NMDA受体NR1功能亚基对精神分裂症海马神经发生调控的研究

发布时间：2017-10-13 17:35

  本文关键词：NMDA受体NR1功能亚基对精神分裂症海马神经发生调控的研究

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【摘要】：目的本研究通过在体实验，探讨精神分裂症（Schizophrenia，SP）C57/BL小鼠侧脑室注射NMDA （N-甲基-D-天门冬氨酸）受体激动剂后，海马（HIP）齿状回（DG）颗粒细胞层NR1、BrdU（5-溴脱氧尿嘧啶核苷）和Ki67（细胞增殖细胞核抗原）阳性细胞数量的改变。在离体水平，培养海马神经干细胞（NSCs），用MTS法及流式细胞检测MK-801（地卓西平马来酸盐）及NMDA对海马神经干细胞增殖及凋亡的影响；免疫细胞法检测NR1与BrdU的表达情况。探讨其可能的作用机制，旨在阐述NR1在精神分裂症发病机制中可能的潜在价值，以期为下一步研究提供实验依据。 方法1免疫荧光法检测C57/BL小鼠海马DG颗粒细胞下层NR1、BrdU及Ki67的改变；2海马NSCs原代培养及鉴定；3MTS法摸索MK-801及NMDA对海马NSCs作用时间及浓度；4MTS法检测MK-801及NMDA对海马NSCs增殖的影响；5流式细胞技术检测MK-801及NMDA对NSCs细胞凋亡的影响；6细胞免疫荧光法检测NR1及BrdU的表达情况。 结果1免疫荧光法检测海马DG区NR1、BrdU及Ki67的改变：1）NMDA组和空白组的NR1阳性细胞数分别低于SP组20.50%和33.79%（P0.05），，低于生理盐水（NS）组21.12%和34.48%（P0.05）；NMDA组较空白组无明显差异（P0.05）。2）BrdU与Ki67阳性细胞数改变趋势大体一致。NMDA组和空白组的BrdU阳性细胞数分别高于SP组34.62%和35.85%（P0.05），高于NS组32.69%和33.96%（P0.05）；NMDA组较空白组无明显差异（P0.05）。Ki67阳性细胞变化主要表现为NMDA组显著升高，分别高于SP组和NS组64.41%和41.85%（P0.001），较空白组下降11.09%（P0.01）。 2MTS法摸索MK-801及NMDA对海马NSCs作用时间及浓度：MK-801确定作用时间为24h，终浓度为200μM；NMDA的作用时间为2h，终浓度为100μM。 3MTS法检测MK-801及NMDA对海马NSCs增殖的影响：其他各组较空白组的OD值均有所降低，且有统计学意义（P0.01）；MK-801组较NMDA组及M+N组的OD值均降低，其细胞存活率较NMDA组降低43.83%（P0.001），较M+N组降低42.25%（P0.01）；NMDA组较M+N组的OD值无明显差异（P0.05）。 4流式细胞仪检测NMDA及MK-801对NSCs细胞凋亡的影响：1）细胞存活率：M+N组与Control组较NMDA组、MK-801组均增高，且两组间无统计学差异（P0.05）。2）总凋亡率：M+N组与空白组较NMDA组、MK-801组均降低，且M+N组的总凋亡率分别较MK-801组和NMDA组降低26.89%和19.79%（P0.05），M+N组较空白组无显著性差异（P0.05）。3）早期凋亡率：M+N组与空白组较NMDA组、MK-801组有所降低，且M+N组的早期凋亡率分别较MK-801组和NMDA组降低55.68%和50.45%（P0.001），M+N组较空白组无显著性差异（P0.05）。4）晚期凋亡率：M+N组与空白组的细胞较NMDA组、MK-801组有所升高，且M+N组的晚期凋亡率分别较MK-801组和NMDA组降低41.21%和51.07%（P0.01），M+N组较空白组无统计学差异（P0.05）。 5细胞免疫荧光法检测NR1及BrdU的表达情况：各组间NR1及BrdU的平均光密度值无统计学差异（P0.05）。 结论：SP小鼠侧脑室注射NMDA受体激动剂后，可引起DG区颗粒层NR1阳性细胞数降低和BrdU及Ki67阳性神经细胞数的升高。MK-801及NMDA均对海马NSCs产生抑制增殖作用，随着药物作用时间的延长和浓度的增加，MK-801及NMDA对细胞增殖的抑制作用亦逐渐加强。MK-801作用于海马NSCs的终浓度及作用时间为200μM24h，NMDA的终浓度及作用时间为100μM2h。NMDA可抑制MK-801所产生的神经细胞毒性，具有神经保护作用。
【关键词】：精神分裂症 海马 NMDA NR1 MK-801
【学位授予单位】：宁夏医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R749.3
【目录】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-9
• 中英文缩略词表9-11
• 前言11-14
• 材料与方法14-31
• 1 动物实验14-20
• 1.1 材料14-18
• 1.2 实验方法和步骤18-20
• 2 细胞实验20-30
• 2.1 材料20-24
• 2.2 实验方法和步骤24-30
• 3 统计学处理30-31
• 结果31-50
• 1 侧脑室注射 NMDA 后 SP 小鼠海马 DG 区 NR1、BrdU 及 Ki67 的改变31-36
• 2 在细胞水平检测 MK-801 及 NMDA 对海马 NSCs 的影响36-50
• 讨论50-53
• 结论53-54
• 参考文献54-59
• 综述59-68
• 参考文献64-68
• 致谢68-69
• 攻读学位期间发表的学术论文69-70
• 个人简历70

【参考文献】

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1 李忠杰;王保捷;丁梅;庞灏;孙雪菲;杨俊;;谷氨酸受体基因单核苷酸多态性与精神分裂症的关联[J];法医学杂志;2008年05期

2 唐劲松,陈晓岗;谷氨酸与精神分裂症:寻找新的抗精神病药物[J];国外医学(精神病学分册);2004年02期

3 孙大伟;金孝\

本文编号：1026223