α7nAChR和nNOS在Aβ诱导的认知障碍大鼠中枢表达的变化及其对学习记忆功能的影响

发布时间：2017-10-26 05:27

  本文关键词：α7nAChR和nNOS在Aβ诱导的认知障碍大鼠中枢表达的变化及其对学习记忆功能的影响

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【摘要】：目的:本文旨在探讨烟碱型乙酰胆碱受体(nicotinic acetylcholine receptor,n ACh R)与神经元型一氧化氮合酶(neuronal nitric oxide synthetase,n NOS)在Aβ诱导的认知障碍大鼠皮质和海马的时间和空间分布与变化及其对学习记忆认知功能的影响。观察Aβ诱导的认知障碍模型大鼠在持续不同的时间内皮质及海马各区α7n ACh R和n NOS水平和分布的变化,分析其在认知障碍模型大鼠中枢分布的空间特征及其随时间变化的规律;以及在复制模型的同时侧脑室反复多次应用NO前体左旋精氨酸(L-arginine,L-Arg)或α7n ACh R激动剂氯化胆碱(choline chloride,CC)和联合应用L-Arg和CC对认知功能障碍模型大鼠皮质和海马n NOS和α7n ACh R水平和学习记忆认知功能的影响,探讨中枢NO能系统与烟碱系统在大鼠认知功能障碍的相互作用。方法:第一部分:SD大鼠60只,随机分成6组,其中3个实验组分别经侧脑室注射凝聚态Aβ1-42(2.5μg/μl,4μl),连续观察7d(7 d Aβ组)、14 d(14 d Aβ组)和21 d(21 d Aβ组);3个对照组(分别为7 d NS组、14 d NS组和21 d NS组)则注射等量生理盐水和观察相同的时间。用Y迷宫刺激器对大鼠进行学习和记忆行为能力检测。用免疫组织化学染色和Western-blot检测皮质和海马CA1、CA3、DG各区n NOS和α7n ACh R阳性细胞分布和蛋白表达量的变化。第二部分:40只SD大鼠随机分成4组,每组经侧脑室注射Aβ1-42(2.5μg/μl,4μl),30 min后分别再注射:NO前体L-Arg(17.5μg/μl)(Aβ+L-Arg组)、或α7n ACh R激动剂CC(8μg/μl)(Aβ+CC组)、或等量的L-Arg和CC(Aβ+L-Arg+CC组)、以及生理盐水(Aβ+NS组),每天各一次,每次5μl,连续7天。各组于最后一次给药30 min后进行行为学检测、免疫组织化学染色和Western-blot检测。结果:(1)第一部分结果:1)Y迷宫行为学检测结果显示,各组大鼠在连续4天的检测中其学习和记忆达标次数均随测试天数的增加而减少。大鼠学习和记忆达标次数,在3个实验组与各自对照组比较均增多(均为P0.01);在3个实验组之间比较,14 d组较7 d组增多(均为P0.05),21 d组较14 d组增多(P0.05或P0.01);而在3个对照组之间比较均没有明显差异。2)免疫组化和Western-blot检测n NOS和α7n ACh R在皮质和海马各区表达的积分光密度值和蛋白表达量,在3个实验组与各自对照组比较均降低(P0.05或P0.01),特别是前额叶皮质浅层和海马CA3区变化明显;在3个实验组之间比较,14 d组较7 d组降低(P0.05或P0.01),21 d组较14 d组上述指标降低(P0.05或P0.01);3个对照组之间比较均没有明显差异。(2)第二部分结果:1)Y迷宫行为学检测结果,其学习和记忆达标次数,在Aβ+L-Arg组(均为P0.05)或Aβ+CC组(P0.05或P0.01)与Aβ+NS组比较均减少;在Aβ+L-Arg+CC组与Aβ+L-Arg组(P0.05或P0.01)或Aβ+CC组(P0.05或P0.01)比较均减少。2)前额叶皮质和海马各区n NOS或α7n ACh R表达的积分光密度值和蛋白表达量,在Aβ+L-Arg组(均为P0.05)或Aβ+CC组(P0.05或P0.01)与Aβ+NS组比较均增多;在Aβ+L-Arg+CC组与Aβ+L-Arg组(P0.05或P0.01)或Aβ+CC组(P0.05或P0.01)比较均增多。结论:(1)在侧脑室注射Aβ诱导的大鼠认知障碍模型中,大鼠的学习记忆行为能力和前额叶皮质及海马α7n ACh R和n NOS表达随Aβ作用时间的延长呈进行性下降,且二者的表达变化在前额叶皮质浅层和海马CA3区最明显。(2)侧脑室联合应用L-Arg和CC可明显促进二者单独应用时对n NOS和α7n ACh R表达水平的提高及大鼠认知障碍功能改善的效应。中枢n NOS与烟碱系统的协同作用更有利于改善大鼠的认知障碍功能。
【关键词】：阿尔茨海病 α7烟碱型乙酰胆碱受体 神经元型一氧化氮合酶 Y-迷宫 学习记忆
【学位授予单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R749.16
【目录】：

• 摘要6-8
• Abstract8-11
• 前言11-12
• 第一部分 α7n ACh R和n NOS在Aβ诱导的认知障碍大鼠前额叶皮质和海马表达的时间和空间的变化12-29
• 1 材料与方法12-17
• 1.1 实验动物12
• 1.2 主要试剂及仪器12-13
• 1.3 动物筛选及侧脑室插管13
• 1.4 动物分组及给药13
• 1.5 大鼠学习和记忆行为能力检测13-14
• 1.6 组织处理14
• 1.7 皮质和海马各区α7n ACh R和n NOS阳性细胞表达检测14
• 1.8 海马n NOS和α7n ACh R蛋白含量检测14-16
• 1.9 统计学处理16-17
• 2 结果17-26
• 2.1 大鼠 Y 迷宫学习和记忆行为学检测结果17-18
• 2.2 大鼠前额叶皮质和海马 n NOS-LI 和α7n ACh R-LI 免疫组织化学染色结果18-24
• 2.3 Western-Blot检测结果24-26
• 3 讨论26-28
• 4 结论28-29
• 第二部分 中枢一氧化氮合酶与烟碱型乙酰胆碱受体对Aβ诱导的大鼠认知功能障碍的影响29-39
• 1 材料与方法29-32
• 1.1 实验动物29
• 1.2 主要试剂及仪器29
• 1.3 动物筛选及侧脑室插管29
• 1.4 动物分组及给药29-30
• 1.5 大鼠学习和记忆行为能力检测(30
• 1.6 组织处理30
• 1.7 皮质和海马各区α7n ACh R和n NOS阳性细胞表达检测30-31
• 1.8 海马n NOS和α7n ACh R蛋白含量检测31
• 1.9 统计学处理31-32
• 2 结果32-36
• 2.1 大鼠学习和记忆行为学能力检测32-33
• 2.2 免疫组化染色结果33-35
• 2.3 Western-Blot检测结果35-36
• 3 讨论36-38
• 4 结论38-39
• 参考文献39-43
• 综述43-58
• 参考文献52-58
• 致谢58-59
• 在学期间承担/参与的科研课题与研究成果59-60
• 个人简历60

【参考文献】

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1 杨伟;未小明;荆治华;赵建强;刘丽霞;祁文秀;;一氧化氮对大鼠学习记忆和胆碱能系统的影响[J];神经解剖学杂志;2013年02期

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本文编号：1097236