姜黄素通过Caveolin-1在AD中发挥神经保护作用的分子机制

发布时间：2017-11-13 00:04

  本文关键词：姜黄素通过Caveolin-1在AD中发挥神经保护作用的分子机制

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【摘要】：目的：细胞膜小凹的标志蛋白Caveolin-1与阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease，AD）密切相关，它不仅与AD时胆固醇失衡有关，还参与裂解β淀粉样蛋白前体蛋白（amyloid β-protein precursor，APP）和生成β淀粉样蛋白（β-amyloid peptide，Aβ）。有研究表明姜黄素在AD中发挥神经保护作用，但其对AD中Caveolin-1的影响及作用机制目前尚不清楚。本实验通过体内外研究姜黄素对Caveolin-1的表达和糖原合成酶激酶-3β（glycogen synthase kinase-3β，GSK-3β）活性的影响，以及对Tau蛋白的影响，探讨其发挥作用的机制，为姜黄素有效防治AD提供新的理论依据。 方法：体外实验部分，N2a细胞分为三组：WT组（N2a/WT细胞）、APP组（N2a/APP695swe细胞）和CUR组（5μM姜黄素处理24h的N2a/APP695swe细胞）；电镜观察细胞膜小凹结构的变化；免疫荧光方法检测细胞内Tau、Tau-Ser404、Caveolin-1、GSK-3β和GSK-3β-Ser9的定位和表达变化；Western blot方法检测细胞内Tau、Tau-Ser404、Caveolin-1、GSK-3β和GSK-3β-Ser9的蛋白水平变化；Real-time PCR方法检测细胞内Caveolin-1mRNA水平变化。体内实验部分，六月龄APP/PS1双转基因小鼠随机分为四组：NOR组（APP/PS1双转基因阴性小鼠）、MOD组（APP/PS1双转基因阳性小鼠）、LCUR组（含0.16g/kg姜黄素的混合饲料饲喂6个月的阳性小鼠）和HCUR组（含1.0g/kg姜黄素的混合饲料饲喂6个月的阳性小鼠）；免疫组化方法检测小鼠大脑海马区域Tau、Tau-Ser404、Caveolin-1、GSK-3β和GSK-3β-Ser9的表达变化；Western blot方法检测小鼠大脑内Tau、Tau-Ser404、Caveolin-1、GSK-3β和GSK-3β-Ser9的蛋白水平变化；Real-time PCR方法检测小鼠大脑内Caveolin-1mRNA水平变化。 结果：体外实验部分，电镜结果显示姜黄素使N2a/APP695swe细胞膜上的小凹数量减少，小凹结构处细胞膜变薄；免疫荧光和Westernblot结果显示姜黄素使细胞内Tau-Ser404/Tau表达水平下降（P＜0.001），，Caveolin-1表达水平下调（P＜0.001），GSK-3β-Ser9/GSK-3β表达水平升高（P＜0.05）；Real-time PCR结果显示姜黄素使细胞内Caveolin-1mRNA表达下降（P＜0.01）。体内实验部分，免疫组化和Western blot结果显示姜黄素使AD小鼠脑内Tau-Ser404/Tau表达水平下降（P＜0.01）， Caveolin-1表达水平下调（P＜0.05），GSK-3β-Ser9/GSK-3β表达水平升高（P＜0.05）；Real-time PCR结果显示姜黄素使AD小鼠脑内Caveolin-1mRNA表达下降（P＜0.05）。 结论：姜黄素能够通过下调Caveolin-1的表达抑制GSK-3β的活性，进而抑制Tau蛋白的异常过度磷酸化，在AD中发挥神经保护作用，提示Caveolin-1可能在姜黄素防治AD的过程中发挥着重要作用，本实验结果为姜黄素防治AD提供了新思路。
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R749.16

【共引文献】

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1 李秋萍;戴俊东;翟文文;蒋俏丽;;单纯形网格法优化设计姜黄素-胡椒碱复方自微乳制剂处方[J];中国中药杂志;2014年20期

本文编号：1178184