EGCG改善CUMS对大鼠学习记忆能力损害的自噬—溶酶体途径依赖机制的研究

发布时间：2018-01-31 00:50

本文关键词： EGCG 慢性不可预知温和应激自噬溶酶体通路 Aβ1 42 学习记忆能力 mTOR信号通路　出处：《南华大学》2014年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：目的：探讨慢性不可预知温和应激对大鼠海马CA1区细胞Aβ1-42沉积和自噬的影响。观察EGCG改善慢性不可预知温和应激对大鼠学习记忆能力损害的作用，并初步探讨其可能的机制。方法：雄性Wistar大鼠50只，随机分为正常对照组（Control组)、慢性不可预知应激组(CUMS组)、EGCG+慢性不可预知应激组（EGCG组)、EGCG+CQ+慢性不可预知温和应激组（CQ组）和生理盐水+慢性不可预知应激组（Vehicle组),每组各10只。除Control组外，其余各组予以慢性应激处理,持续4周。从慢性应激第一天开始，EGCG组大鼠经侧脑室套管注射2ulEGCG(20ug/kg), CQ组大鼠注射EGCG和CQ各2ul，Vehicle组注射2ul无菌生理盐水。每天注射一次，药物注射速度控制在0.4ul/min，连续注射4周。各组大鼠在慢性应激第4周进行Morris水迷宫实验。水迷宫实验完成后，所有大鼠断尾采血，断头取海马CA1区组织，采用酶联免疫法测定血浆皮质酮含量，HE染色观察形态学改变，TUNEL染色观察神经细胞凋亡情况，透射电镜观察自噬体形成情况，Western-Blot法检测自噬相关蛋白LC3、P62、Beclin1、P-mTOR及P-P70（P-P70S6K）的表达，免疫组化检测Aβ1 42（β-淀粉样蛋白1-42）的表达。结果：（1）血浆皮质酮测定：与Control组相比，，CUMS组皮质酮含量明显升高,差异有统计学意义P0.05)。CUMS组与EGCG组相比，两组大鼠皮质酮水平无明显差异（P0.05)。CQ组与EGCG组皮质酮水平无明显差异（P0.05)。（2）Morris水迷宫实验：与Control组相比，CUMS组大鼠逃避潜伏期显著延长，学习记忆能力明显下降，EGCG处理后大鼠逃避潜伏期明显缩短，学习记忆能力明显升高。与EGCG组比较，CQ组大鼠逃避潜伏期明显延长，学习记忆能力显著下降。（3）病理学检测结果：HE染色结果：相对Control组，CUMS组大鼠海马CA1区细胞数目明显减少，分布紊乱，大小不一致，大部分细胞边缘模糊。EGCG处理后细胞数量明显增多，细胞损伤明显改善。与EGCG组比较，CQ组大鼠海马CA1区神经细胞数量明显减少，两者有统计学意义（P0.05)。TUNEL染色观察到CUMS组大鼠海马CA1区出现大量神经细胞凋亡。与CUMS组比较，EGCG组大鼠海马CA1区凋亡细胞明显减少，差异有统计学意义（P0.05)。与EGCG组相比，CQ组CA1区神经细胞的凋亡显著增加，差异有统计学意义（P0.05)。透射电镜显示：与Control组比较，CUMS组海马CA1区神经细胞自噬小体和肿胀的线粒体数量明显增多。与CUMS组相比，EGCG组大鼠CA1区自噬小体和肿胀的线粒体数量明显减少。CQ处理后CA1区神经细胞自噬小体和肿胀的线粒体数量显著增多。（4）Western-Blot检测结果：CUMS组海马CA1区LC3-I、LC3-II、p62、p-mTOR和P-P70的表达量均明显高于Control组，差异有显著性（P0.05)。与CUMS组相比，EGCG组LC3-I、LC3-II、p62、P-mTOR和P-P70的表达量明显下降，差异均有统计学意义（P0.05)。Control组和CUMS组海马CA1区Belin-1表达水平和LC3-II/LC3-1比值无明显差异。与EGCG组比较，CQ组海马CA1区LC3-I、LC3-II、p62、p-mTOR和P-P70的表达量均明显增多，差异有统计学意义（P0.05)。（5）免疫组化结果：与Control组比较，CUMS组大鼠海马CA1区Aβ1 42含量明显增多，差异有显著性（P0.05)。与CUMS组相比，EGCG组CA1区Aβ1 42含量明显下降,差异有统计学意义（P0.05)。CQ组CAI区Aβ1 42含量比EGCG组明显增多，差异有显著性（P0.05)。结论： 1..慢性温和应激可以导致大鼠海马CA1区细胞内Aβ1 42的沉积和自噬溶酶体途径的损害。 2.EGCG可以改善慢性温和应激对大鼠学习记忆能力和海马CA1区细胞自噬溶酶体途径的损害，其机制可能与恢复调节异常的mTOR信号通路有关。
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【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R749.1

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