不同时程吗啡依赖对大鼠大脑皮层神经细胞的影响

发布时间：2018-03-10 15:54

  本文选题：吗啡依赖　切入点：大脑皮层　出处：《河北医科大学》2015年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：目的:吗啡具有明显的镇痛作用是众所周知的,但它同时又具有很高的成瘾性,近年来吗啡的滥用呈明显增高趋势,严重危害了人类身心健康,社会安定和谐。持续的吗啡摄取对全身各系统均可造成不同程度的损害,其中对神经系统的毒性损害最为显著。长期吗啡依赖导致了包括大脑皮层在内的较多脑区发生病理性改变,导致大脑发生急、慢性缺血,缺氧,从而引发神经细胞和神经纤维的一系列损伤性改变,目前国内外对于吗啡依赖的研究主要限于机能和代谢方面,病理形态方面的研究尚不够详细。迄今为止的研究虽然表明吗啡依赖导致了神经细胞的损伤,但是何种基因蛋白参与了神经损伤、神经保护及神经结构的重塑,目前国内外尚无详细报道。在参与调节神经细胞生存、维持及损伤的众多转录因子中,神经细胞微管蛋白2(microtubeasso ciated protein2,MAP2),信号转导及转录激活蛋白3(Signal Transduction and transcription protein-3,STAT-3),载脂蛋白酶E(apolipoprotein E,APOE),3-硝基酪氨酸(3-nitrotyrosine,3-NT)、C-fos在不同时程吗啡依赖中的表达变化目前国内外未见详细报道,本研究目的旨在探明MAP2、STAT-3、APOE、3-NT及C-fos在不同时程吗啡依赖中的表达状态,为吗啡毒性作用导致的神经损伤的机制研究提供病理形态学依据。方法:1本实验采用健康Wistar大鼠,体重为(300±20)g的健康雌性大鼠64只,分为空白对照组1周组、吗啡依赖1周组,空白对照组2周组、吗啡依赖2周组,空白对照组4周组、吗啡依赖4周组,空白对照组6周组和吗啡依赖6周组。吗啡依赖4组大鼠按逐日递增原则,背部皮下注射盐酸吗啡,每天二次(8:00,20:00),连续5天。剂量分别为10mg·kg-1,20mg·kg-1,30mg·kg-1,40mg·kg-1,50mg·kg-1。每次注射前均用75%酒精严格消毒,一次性注射器注射。5天后确认吗啡依赖形成后,吗啡依赖1周组、2周组、4周组、6周组分别给予30mg·kg-1盐酸吗啡背部皮下注射,一天两次(8:00,20:00),分别连续注射至1周、2周、4周、6周,建立四个不同时段的吗啡依赖大鼠模型。空白对照1周组、2周组、4周组、6周组分别注射等剂量的生理盐水,分别连续注射至1周、2周、4周、6周。模型建立后,脑组织经固定、脱水、透明、包埋、连续切片等处理后待做各种染色使用。①苏木精-伊红(HE)染色观察常规病理学改变。②硫堇特殊染色观察神经细胞尼氏体变化。③Fluoro-Jade B染色以及原位末端标记法(TUNEL)检测吗啡导致的神经细胞变性坏死及凋亡情况。④免疫组织化学染色观察相关蛋白表达变化。2统计学分析:数据以“均数±标准差(Mean±SD)”表示,用SPSS 13.0统计软件进行统计学分析,各组均数的比较行单因素方差分析(ANOVA),用最小显著差法(least significant difference,LSD)作两两比较,以P0.05为有显著统计学差异。结果:1 HE染色结果正常对照组大鼠大脑皮层组织结构清晰,各层神经细胞排列整齐,未见明显病理形态学改变;吗啡依赖1周组神经细胞无明显改变,吗啡依赖2周组小血管周围间隙稍有增大;吗啡依赖4周组可见少量神经细胞固缩,神经细胞水肿,小血管及神经细胞周围间隙增大,小胶质细胞增生;吗啡依赖6周组可见组织结构疏松,神经细胞水肿,部分神经细胞固缩,小胶质细胞增生明显。2硫堇染色结果正常对照组可见神经细胞尼氏体颗粒清晰可辨;吗啡依赖1周组与2周组未见明显改变;4周组尼氏体数量减少,结构不清;6周组尼氏体消失,细胞固缩。3 Fluoro-Jade B染色观察大鼠大脑皮层神经细胞变性坏死情况正常对照组未见变性坏死阳性细胞;吗啡依赖1周组与2周组未见变性坏死阳性细胞;4周组偶见变性坏死阳性细胞;6周组变性坏死阳性细胞明显增多。4原位末端标记法(TUNEL)结果吗啡依赖各组均未检测到凋亡细胞,表明大脑皮层神经细胞在本实验设定的吗啡依赖时程内未发生明显的细胞凋亡。5免疫组织化学染色5.1 MAP2免疫组织化学染色结果正常对照组大鼠大脑皮层神经细胞胞浆及突触中MAP2呈强阳性表达,吗啡依赖1周、2周、4周、6周阳性表达随吗啡依赖时间的延长呈下降趋势。5.2 STAT-3、APOE免疫组织化学染色结果吗啡依赖1周组与2周组大鼠大脑皮层神经细胞STAT-3、APOE阳性表达与正常对照组相比呈上升趋势,随着吗啡依赖时程的延长4周、6周组阳性表达又呈现了减少趋势。5.3 3-NT免疫组织化学染色结果吗啡依赖1周组与2周组大鼠大脑皮层神经细胞3-NT阳性表达与正常组相比未见明显差异,4周、6周阳性表达呈逐渐增高趋势。5.4 C-fos免疫组化化学染色结果正常组未见阳性表达;吗啡依赖1周组少量阳性表达;吗啡依赖其余各组未见表达。结论:本研究成功建立了大鼠不同时程吗啡依赖模型,通过常规组织病理学、组织化学特染及免疫组织化学观察,得出以下结论:较长时程的吗啡依赖导致了大脑皮层神经细胞的变性、坏死,MAP2、STAT-3、APOE、3-NT、C-fos参与了神经细胞的变性坏死。
[Abstract]:Objective: morphine has obvious analgesic effect is as everyone knows, but it at the same time, which is highly addictive, in recent years, morphine abuse increased significantly, serious harm to human health, social stability and harmony. Sustained morphine intake cause different damage to the body of the system can be the toxic damage to nerve the system is the most significant. The long-term morphine dependence leads to more areas of the brain including the cerebral cortex, the pathological changes of the brain, leading to the occurrence of acute, chronic ischemia, hypoxia, which triggered a series of damage of nerve cell and nerve fiber changes at home and abroad for the study of morphine dependence is mainly limited to the aspects of function and metabolism. Study on the pathological aspects are not detailed. The research so far suggests that although morphine dependence leads to nerve cell damage, but what kind of gene protein involved in God After injury, neuroprotection and remodeling of neural structures, both at home and abroad have not been reported in detail. In the regulation of neuronal cell survival, maintenance and damage of many transcription factors, nerve cell microtubule protein 2 (microtubeasso ciated protein2, MAP2), signal transduction and transcription activator protein 3 (Signal Transduction and transcription protein-3, STAT-3). Apolipoprotein E (apolipoprotein E, APOE protease), 3- nitrotyrosine (3-nitrotyrosine, 3-NT), the expression of C-fos in different time dependent changes in Cheng Mafei, there is no detailed report, the purpose of this study is to explore MAP2, STAT-3, APOE, 3-NT and C-fos expression in different time dependent Cheng Mafei's pathology study on the mechanism of the morphological basis for nerve injury leading to morphine toxicity. Methods: in this experiment, 1 healthy Wistar rats, weight (300 + 20) g the health of 64 female rats, 鍒嗕负绌虹櫧瀵圭収缁，

本文编号：1594032