慢病毒介导p16ink4a基因沉默对老龄脂肪间充质干细胞增殖分化能力的影响

发布时间：2018-03-27 07:02

  本文选题：脂肪间充质干细胞　切入点：慢病毒　出处：《中南大学》2014年硕士论文

【摘要】：研究背景： 阿尔茨海默病(Alzheimer's disease, AD)是威胁老年人生活质量与晚年生活的神经系统退行性病变之一,其发病机制不明,目前尚无有效的治疗方法。干细胞移植是阿尔茨海默病治疗方法之一,而脂肪间充质干细胞(adipose derived mesenchymal stem cells, ADSCs)由于其来源广泛、创伤小等优势被国内外学者广泛关注。但由于阿尔茨海默病通常高发于老年人中,所以自体干细胞将面临由于生理性衰老而导致的功能衰退,治疗效果减低的问题。p16ink4a基因作为一种抑癌基因,在衰老干细胞中过度表达,并且在体外培养的衰老／QADSCs中也表达上调。因此,利用慢病毒介导的RNA干扰(RNA interference, RNAi)技术可望阻断衰老ADSCs中的p16ink4a基因,缓解干细胞功能衰退,从而提高其治疗阿尔茨海默病的治疗效果。 目的： 利用慢病毒介导的RNAi技术阻断老龄ADSCs中p16ink4a基因表达,观察p16ink4a基因沉默后,老龄ADSCs增殖能力、衰老情况以及向神经细胞定向分化能力的变化。 方法： 取SD大鼠的腹股沟和腹膜后脂肪,分离体外培养青年大鼠及老年大鼠ADSCs,流式细胞术鉴定表面分子标志物。将ADSCs分为以下四组：经慢病毒转染的老龄ADSCs(老龄ADSCs+慢病毒9934-1),经阴性对照病毒转染的老龄ADSCs(老龄ADSCs+阴性对照病毒CONO49),未经任何处理的老龄ADSCs(老龄ADSCs),加入磷酸缓冲盐溶液(PBS)的老龄ADSCs(老龄ADSCs+PBS)。Western blot、realtime PCR测定四组ADSCs中p16ink4a基因的表达差异。然后以青年ADSCs组作为对照,MTT比色法描绘生长曲线探查五组ADSCs增殖能力差别。对五组细胞进行衰老染色以观察干细胞衰老情况。过两步诱导法诱导ADSC向神经细胞方向分化,免疫荧光法检测分化后细胞Nestin的表达情况,比较五组细胞分化能力的区别。 结果： 1.从大鼠的脂肪组织中可成功提取老龄及青年ADSCs,并稳定增殖传代。提取的ADSCs强烈表达CD29. CD90,低表达CD1lb。 2.与其他三组老龄ADSCs相比,老龄ADSCs+慢病毒9934-1组中p16ink4a基因表达明显降低(P0.05)。而老龄ADSCs+阴性对照病毒CONO49组,老龄ADSCs组及老龄ADSCs+PBS组之间p16ink4a基因表达无显著性差异。 3.与其他三组老龄ADSCs相比,老龄ADSCs+慢病毒9934-1组生长能力及诱导分化后细胞Nestin的表达情况明显提高(P0.05),但低于青年ADSCs组(P0.05)。而老龄ADSCs+阴性对照病毒CONO49组,老龄ADSCs组及老龄ADSCs+PBS组之间生长能力及诱导分化后细胞Nestin的表达情况无显著性差异。 4.与其他三组老龄ADSCs相比,老龄ADSCs+慢病毒9934-1组衰老细胞比例明显降低(P0.05),但高于青年ADSCs组(P0.05)。而老龄ADSCs+阴性对照病毒CONO49组,老龄ADSCs组及老龄ADSCs+PBS组之间衰老细胞比例无显著性差异。 结论： 1.利用慢病毒转染可成功抑制老龄ADSCs中的p16ink4a基因表达。 2. pl6ink4a基因沉默后的老龄ADSCs在一定程度上延缓了老龄ADSCs的衰老程度,改善了其增殖能力和向神经细胞的定向分化能力。
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【学位授予单位】：中南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R749.16

【参考文献】

相关期刊论文 前2条

1 童坦君 ,张宗玉;细胞衰老主导基因p16的作用机理及其负调控[J];中国生物化学与分子生物学报;2002年01期

2 杨立业;郑佳坤;汪朝阳;林小聪;李文玉;许曼丹;;人脂肪组织来源的基质细胞分化为神经元样细胞的体外研究[J];中国修复重建外科杂志;2006年08期

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本文编号：1670486