稳定表达人BACE1启动子及荧光素酶报告基因HEK293细胞株的建立

发布时间：2018-03-31 15:45

  本文选题：β位点裂解酶-　切入点：核心启动子　出处：《重庆医学》2017年03期

【摘要】：目的对人β位点裂解酶-1(BACE1)基因核心启动子进行克隆,构建携带BACE1基因启动子的荧光素酶报告载体,筛选稳定表达细胞株并分析其转录活性。方法提取人胚肾HEK293细胞基因组DNA,以其为模板,PCR扩增BACE1核心启动子(-691~+67)并克隆至荧光素酶报告载体pGL4.21中,构建BACE1基因启动子荧光素酶报告载体pGL4.21-BACE1,将其转染HEK293细胞(无启动子的pGL4.21载体作阴性对照),利用嘌呤霉素筛选稳定表达株后检测其转录活性。结果成功扩增到758bp的BACE1核心启动子,pGL4.21-BACE1载体经双酶切鉴定正确;HEK293细胞被该载体转染后经嘌呤霉素筛选得到6株稳定表达BACE1启动子的细胞株,其转录活性分别是对照组(HEK293/pGL4.21)的(134.7±22.3)、(634.0±13.9)、(437.6±6.1)、(805.5±5.5)、(492.8±59.1)、(1 021.1±46.6)倍(P=0.001)。结论成功构建了人BACE1基因启动子荧光素酶报告载体。
[Abstract]:Objective to clone the core promoter of human 尾 -locus lyase (尾 -locus) and construct a luciferase report vector carrying the promoter of BACE1 gene to screen the stable expressed cell line and analyze its transcriptional activity.Methods the genomic DNA of human embryonic kidney HEK293 cells was extracted, and the core promoter of BACE1 was amplified by PCR. It was cloned into luciferase report vector pGL4.21.BACE1 gene promoter luciferase report vector pGL4.21-BACE1 was constructed and transfected into HEK293 cells (pGL4.21 vector without promoter was used as negative control). The transcriptional activity of pGL4.21-BACE1 was detected by purine mycin screening.Conclusion the luciferase reporter vector of human BACE1 gene promoter was successfully constructed.
【作者单位】： 重庆医科大学附属第一医院神经病学重点实验室;重钢总医院重症医学科;
【基金】：国家自然科学基金国际合作重大项目(81220108010);国家自然科学基金(81171197) 重庆市卫生局重点基金(2011-1-018)
【分类号】：R749.16

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本文编号：1691391