曲克芦丁对STZ糖尿病大鼠认知功能障碍及Nrf2表达的影响

发布时间：2018-04-13 03:04

  本文选题：α-硫辛酸 + 曲克芦丁　； 参考：《河北医科大学》2012年硕士论文

【摘要】：目的：糖尿病脑病亦称为糖尿病相关认知减退，主要特征为学习和记忆功能障碍。新近研究显示氧化应激是糖尿病脑病发生和发展的重要影响因素。核因子E2相关因子2(Nuclear factor E2一related factor2，Nrf2)是调控细胞内源性抗氧化应激防御体系的核心转录因子。超氧化物歧化酶（Superoxide dismutase, SOD）和丙二醛（Malondialdehyde, MDA）是反应组织氧化抗氧化平衡的经典指标。本实验旨在探讨曲克芦丁对链脲佐菌素(Streptozotocin，STZ)糖尿病大鼠认知功能障碍以及海马中Nrf2表达、SOD活力和MDA含量的影响。 方法： 1糖尿病大鼠模型制备：健康雄性SD (Sprague Dawley)大鼠70只（体重150-170g）,随机分为正常对照组（NC组n=10），糖尿病组（DC组n=60），糖尿病组大鼠空腹过夜后一次性腹腔注射链脲佐菌素（STZ）60mg/kg，72h后测尾静脉随机血糖，血糖≥16.7mmol/l为成模标准。成模后第1周和第12周分别行Morris水迷宫实验，第12周水迷宫实验后将糖尿病组随机分为糖尿病对照组（DC组，n=15），糖尿病盐水组（DN组,n=15）,糖尿病α-硫辛酸干预组(DL组,n=15)，糖尿病曲克芦丁干预组(DT组n=15)。 2干预：动物成模后第13周， DL组腹腔注射α-硫辛酸（60mg/kg体重）、DT组腹腔注射曲克芦丁（60mg/kg体重）、DN组和NC组腹腔注射等量生理盐水每日注射1次，历时6周。 3行为学检测：各组大鼠于成模1周、12周和18周时分别进行Morris水迷宫实验，记录逃避潜伏期。 4标本制备及观察指标：18周做完水迷宫实验次日，处死大鼠，迅速取出海马组织测定SOD活力及MDA含量、提取组织总RNA进行Nrf2基因实时荧光定量-聚合酶链反应法（R-T PCR）检测mRNA水平以及通过蛋白免疫印迹法（Western-blot）检测细胞Nrf2总蛋白及核蛋白的表达。所得数据均采用SPSS13.0统计软件包处理，应用重复测量方差分析、多元方差分析及完全随机设计的单因素方差分析统计数据，用均数±标准差表示统计结果，p＜0.05为差异有统计学意义。 结果： 1一般指标观察： 糖尿病大鼠造模造模成功后即出现多尿、多饮、多食等症状，血糖维持在较高水平（＞20.0mmol/l），随着实验进展，逐渐出现便溏、体重下降、毛色枯黄、反应迟钝等现象。正常对照组大鼠毛色滑亮，体重稳定增长。干预过程中，曲克芦丁组大鼠一般情况比α-硫辛酸组好。 2Morris水迷宫结果： 第1周时，与正常组大鼠相比，糖尿病组大鼠逃避潜伏期无统计学差异（P＞0.05），NC组和DC组认知功能无差异。 第12周时，与正常组大鼠相比，糖尿病组大鼠逃避潜伏期延长（p＜0.05），且在相同时间点两组逃避潜伏期有统计学差异（P＜0.05），提示成模后12周，糖尿病大鼠出现糖尿病认知功能障碍。 第18周时，糖尿病对照组逃避潜伏期与糖尿病盐水组相比无显著差异（P＞0.05）。α-硫辛酸干预组与曲克芦丁干预组均比糖尿病对照组（糖尿病盐水组）缩短，，但仍长于正常对照组（P＜0.05）；α-硫辛酸干预组与曲克芦丁干预组间无显著差异（P＞0.05）。3R-T PCR结果： 糖尿病对照组和糖尿病盐水组海马Nrf2mRNA表达量较正常组降低（P＜0.05）；糖尿病对照组与糖尿病盐水组相比无统计学差异（P＞0.05），α-硫辛酸干预组和曲克芦丁干预组的Nrf2mRNA表达量与糖尿病对照组（糖尿病盐水组）相比均增高（P＜0.01，P＜0.05）；α-硫辛酸干预组的Nrf2mRNA表达量高于曲克芦丁组（P＜0.01）。 4Western blot结果： 4.1细胞Nrf2总蛋白的表达：糖尿病对照组和糖尿病盐水组的Nrf2总蛋白表达量均低于正常对照组（P＜0.01）；糖尿病对照组Nrf2总蛋白表达量和糖尿病盐水组相比无统计学差异（P＞0.05）；α-硫辛酸干预组和曲克芦丁干预组的Nrf2总蛋白表达量与糖尿病对照组（糖尿病盐水组）相比均增高（P＜0.01）；α-硫辛酸干预组的Nrf2总蛋白表达量与曲克芦丁干预组相比无统计学差异（P＞0.05）。 4.2细胞Nrf2核蛋白的表达：糖尿病对照组和糖尿病盐水组的Nrf2核蛋白表达量均低于正常对照组（P＜0.01）；糖尿病对照组的Nrf2核蛋白表达量与糖尿病盐水组相比无统计学差异（P＞0.05）；α-硫辛酸干预组和曲克芦丁干预组的Nrf2核蛋白表达量与糖尿病对照组（糖尿病盐水组）相比均增高（P＜0.01）；α-硫辛酸干预组的Nrf2核蛋白表达量高于曲克芦丁干预组（P＜0.05）。 5SOD和MDA结果： SOD活力：糖尿病对照组和糖尿病盐水组SOD活力均弱于正常对照组（P＜0.01）；糖尿病盐水组和糖尿病对照组SOD活力相比无统计学差异（P＞0.05）；α-硫辛酸干预组和曲克芦丁干预组与糖尿病对照组（糖尿病盐水组）相比均增强（P＜0.01）；α-硫辛酸干预组SOD活力与曲克芦丁干预组相比无统计学差异（P＞0.05）。 MDA含量：糖尿病对照组和糖尿病盐水组的MDA含量均高于正常对照组（P＜0.01）；糖尿病对照组的MDA含量和糖尿病盐水组相比无统计学差异（P＞0.05）；α-硫辛酸干预组和曲克芦丁干预组的MDA含量与糖尿病对照组（糖尿病盐水组）相比均增高（P＜0.01）；α-硫辛酸干预组的MDA含量低于曲克芦丁干预组（P＜0.01）。 结论： 1STZ糖尿病大鼠成模12周时学习记忆能力明显下降，大鼠海马氧化应激程度增强且Nrf2表达下调。 2曲克芦丁能上调STZ糖尿病大鼠海马Nrf2表达，拮抗氧化应激，提高其学习记忆能力。
[Abstract]:Objective: diabetic encephalopathy or diabetes related cognitive decline, characterized by learning and memory dysfunction. Recent research shows that oxidative stress is an important factor in the occurrence and development of diabetic encephalopathy. Nuclear factor E2 related factor 2 (Nuclear factor E2 related FACTOR2, Nrf2) is a key transcription factor regulating the endogenous antioxidant defense system. Superoxide dismutase (Superoxide dismutase, SOD) and malondialdehyde (Malondialdehyde, MDA) is a classical indicator of tissue oxidation antioxidation balance. This study aims to explore the Creeding song of streptozotocin (Streptozotocin, STZ) cognitive dysfunction of diabetic rats and the expression of Nrf2 in hippocampus, SOD activity and MDA content.
Method锛

本文编号：1742623