美金刚和瑞舒伐他汀对血管性痴呆大鼠血管再生及神经功能的影响

发布时间：2018-10-13 09:51

【摘要】：目的通过水迷宫实验,观察美金刚和瑞舒伐他汀对血管性痴呆(vascular dementia,VaD)大鼠学习记忆能力的影响;通过对大鼠外周血内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)的测定及海马区微血管密度(microvessel density,MVD)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)测定,分析瑞舒伐他汀和盐酸美金刚对VaD大鼠血管再生的影响并讨论其作用机制;通过对大鼠海马区溴脱氧尿苷(bromodeoxyuridine,BrdU)及脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)的测定并结合海马区CA3-CA1区的长时程增强(long-term potentiation,LTP)的测定,分析瑞舒伐他汀和美金刚对VaD神经修复和神经突触可塑性的影响并讨论其作用机制。方法60只成年雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、瑞舒伐他汀组、美金刚组、瑞舒伐他汀联合美金刚组(联合组),每组各12只。采用永久性结扎双侧颈总动脉方法(2VO)制作VaD模型。瑞舒伐他汀组、美金刚组及联合组术后1周给予瑞舒伐他汀10mg/(kg·d)、美金刚10mg/(kg·d)及美金刚联合瑞舒伐他汀,均为10mg/(kg·d)连续4周灌胃治疗。模型组和假手术组灌胃等量生理盐水。术后5周后通过Morris水迷宫定位航行实验和空间探索实验,记录逃避潜伏期及目标象限百分率,比较药物治疗组、模型组与假手术组大鼠学习记忆能力。各组大鼠中随机抽取6只大鼠于眼球后静脉取血约1ml,利用流式细胞仪测定各组大鼠EPCs计数,取血后断头取脑,行HE染色方法观察各组大鼠海马区细胞形态的变化,免疫组织化学方法检测海马区MVD、BrdU的表达;各组剩余大鼠通过LTP检测海马CA3-CA1区的神经突触可塑性,Western Blot测定各组大鼠海马区BDNF、VEGF蛋白的表达。结果1、Morris水迷宫测试结果与假手术组比较,VaD模型组大鼠术后水迷宫试验逃避潜伏期明显延长(p0.05),目标象限百分率明显减少(p0.05)。与模型组比较,各个治疗组水迷宫逃避潜伏期明显缩短、目标象限百分率明显增加(p0.05)。2、外周血epcs计数结果与模型组比较,美金刚组、瑞舒伐他汀组及联合组术后5周epc显著升高(p0.01);与假手术组比较,瑞舒伐他汀组和联合组术后5周epc显著升高,模型组明显减少(p0.05)。3、he染色与假手术组比较,模型组大鼠海马区神经细胞数量明显减少,排列紊乱,细胞大量萎缩,轮廓不清,出现空泡变性、核固缩,细胞器结构不清。与模型组相比,各治疗组神经细胞数量增多,排列较整齐,细胞形态较完整,仅见少量核固缩。4、免疫组化染色结果mvd计数结果显示:与假手术组比较,模型组术后5周海马区mvd计数明显减少(p0.05)。与模型组比较,美金刚组、联合组术后5周海马区mvd计数明显增多(p0.05);三个药物干预治疗组相比较,联合组mvd计数较美金刚组增多更为明显(p0.05)。brdu阳性细胞计数结果显示:模型组brdu阳性细胞与假手术组比较有所增加(p0.05);药物干预后发现,与模型组相比,瑞舒伐他汀组和联合组brdu阳性细胞数明显增多(p0.05),美金刚组无显著差异(p0.05);三个药物干预治疗组相比较,联合组brdu阳性细胞数较美金刚组明显增多(p0.05)。5、ltp结果与假手术组比较,模型组海马ca3-ca1区ltp明显减低(p0.05);与模型组比较,美金刚组、瑞舒伐他汀组、联合组均明显增强(p0.05);且两药物联合后较单一用药斜率增强更多,差异有统计学意义(p0.05)。6、westernblot结果与假手术组比较,模型组大鼠术后5周vegf蛋白表达轻度上调,bdnf蛋白表达下降(p0.05)。与模型组比较,各治疗组大鼠vegf、bdnf蛋白表达增加(p0.05);三个治疗组比较,联合组bdnf蛋白表达较瑞舒伐他汀组增加更为明显,vegf蛋白表达较美金刚组增加更为明显,且差异有统计学意义(p0.05)。结论1、HE染色发现VaD大鼠海马区细胞排列素乱、呈空泡样变、核固缩及细胞突起减少等,Morris水迷宫实验观察到VaD大鼠空间记忆功能明显减退。提示VO法制作的VaD大鼠模型可以部分模拟人类VaD的病理和行为改变。2、美金刚、瑞舒伐他汀及两药联合均可使VaD大鼠空间学习记忆能力有所改善。但是两药联合使用较单一用药无明显差异。3、首次发现美金刚可以促进VaD大鼠海马区血管再生。4、美金刚、瑞舒伐他汀及两药联合治疗VaD大鼠后能动员其外周血EPCs、提高海马区MVD及VEGF蛋白的表达从而促进血管再生。但是两药联合使用较单一用药无明显差异。5、瑞舒伐他汀治疗VaD大鼠后其海马区BrdU阳性细胞数有所增加,说明他汀类药物可以激活内源性NSCs从而促进神经修复。美金刚、瑞舒伐他汀及两药联合治疗VaD大鼠能使海马区LTP提高,BDNF表达增多,从而改善神经突触可塑性,进而改善VaD大鼠的空间学习记忆能力。两药联合较单一用药对VaD大鼠海马神经突触可塑性改善更有效。
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【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R749.13

【参考文献】