Miz1在阿尔茨海默病中的表达特征及其与自噬的关系研究

发布时间：2018-11-06 17:35

【摘要】：研究目的:在WT和APP/PS1小鼠脑组织急性分离的神经元RNA序列分析中发现Miz1有差异表达,故本研究利用Western blotting、qPCR、免疫荧光等方法,探讨Miz1与AD之间可能存在的关系。研究方法与结果:1.Miz1在APP/PS1鼠大脑皮层的表达较同龄WT鼠高。通过Western blot方法发现Miz1在7月龄APP/PS1鼠和WT鼠的皮层在蛋白水平有差异表达,Miz1在APP/PS1鼠皮层中相较于WT鼠皮层表达增加,同时,Miz1在两者的海马中表达没有明显差异。同样的,分离并提取7月龄APP/PS1鼠和WT鼠的皮层与海马的RNA,逆转录为cDNA,通过q PCR的方法分析Miz1的表达,也发现了Miz1在APP/PS1鼠皮层中的高表达而海马未见明显差异。通过免疫组化的方法,我们研究了Miz1在WT和APP/PS1小鼠中的表达,发现Miz1在7月龄APP/PS1小鼠皮层的高表达,而在海马未发现明显差异。2.利用免疫荧光的方法,我们研究了Miz1在7月龄APP/PS1鼠和WT鼠脑中的表达及定位情况。所用MAP2、GFAP、Miz1抗体的分别标记小鼠脑中神经元、星形胶质细胞、Miz1,通过激光共聚焦显微镜采集图像,发现Miz1标记的图像与APP/PS1鼠和WT鼠脑中神经元及星形胶质细胞的图像均有一定重叠,说明Miz1在APP/PS1鼠和WT鼠的神经元及星形胶质细胞中均有一定程度的表达。3.将质粒PCMV-Miz1瞬时转染到HT22细胞中,处理24小时后提取细胞蛋白进行Western blot实验,结果显示在Miz1过表达的细胞处理组相较于同批次转染空载体质粒的处理组,APP代谢相关蛋白表达量有一定下降,自噬相关蛋白表达量有一定升高。说明Miz1在蛋白水平可能起到抑制APP代谢和促进自噬的作用。结论:Miz1在APP/PS1鼠的皮层表达量较同龄WT鼠高。Miz1在神经元及星形胶质细胞均有表达。Miz1可能参与到APP代谢和自噬的调节中。
[Abstract]:Objective: to investigate the relationship between Miz1 and AD in WT and APP/PS1 mice by using Western blotting,qPCR, immunofluorescence and other methods, the differential expression of Miz1 was found in the analysis of RNA sequence of neurons isolated from the brain tissue of APP/PS1 and WT mice. Methods and results: the expression of 1.Miz1 in cerebral cortex of APP/PS1 rats was higher than that of WT mice of the same age. The expression of Miz1 in the cortex of APP/PS1 rats and WT rats at 7 months of age was found to be different from that of WT mice by Western blot method, and the expression of Miz1 in the cortex of APP/PS1 rats was higher than that of WT mice, while the expression of Miz1 in hippocampus of APP/PS1 rats was not significantly different from that of WT mice. Similarly, the reverse transcription of RNA, from cortex and hippocampus of 7-month-old APP/PS1 and WT rats was isolated and extracted. The expression of Miz1 was analyzed by Q PCR method. The high expression of Miz1 in the cortex of APP/PS1 rats was also found, but there was no significant difference in hippocampus. By immunohistochemical method, we studied the expression of Miz1 in WT and APP/PS1 mice. We found that the high expression of Miz1 was found in the cortex of APP/PS1 mice at 7 months of age, but no significant difference was found in hippocampus. 2. Using immunofluorescence, we studied the expression and localization of Miz1 in 7 months old APP/PS1 mice and WT brains. The neurons and astrocytes of mouse brain were labeled with MAP2,GFAP,Miz1 antibody, and Miz1, was used to collect images by confocal laser microscope. It was found that the images labeled by Miz1 overlapped with those of neurons and astrocytes in WT and APP/PS1 mice, indicating that Miz1 was expressed in both neurons and astrocytes of APP/PS1 and WT mice to a certain extent. The plasmid PCMV-Miz1 was transiently transfected into HT22 cells. After 24 hours of treatment, the cell proteins were extracted for Western blot test. The results showed that the cells treated with Miz1 overexpression were different from those treated with the same batch transfection of unloaded body mass. The expression of APP metabolism-associated protein decreased and autophagy related protein increased. These results suggest that Miz1 may inhibit the metabolism of APP and promote autophagy at the protein level. Conclusion: the expression of Miz1 in cortex of APP/PS1 mice is higher than that of WT mice of the same age. Miz1 is expressed in neurons and astrocytes. Miz1 may be involved in the regulation of APP metabolism and autophagy.
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R749.16

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