WAR5通过ROCK信号通路改善AD模型鼠认知功能的实验研究

发布时间：2018-12-19 18:57

【摘要】：目的:本实验利用AD鼠经典模型APP/PS1双转基因小鼠,研究新型Rho激酶抑制剂WAR5化合物在疾病发生发展过程中对于减少病理产物,抑制炎症方面多种的治疗效果,同时进一步探讨其可能的相关作用机制,为进一步阿尔茨海默病(Alzheimer Disease,AD)的临床治疗提供实验依据。方法:APP/PS1双转基因小鼠模型,按随机原则分为AD组和WAR5组,每组8只。在鼠焌达8月时开始腹腔注射WAR5化合物(40 mg/kg/day),同时AD组小鼠腹腔注射同剂量的生理盐水(0.9%Na Cl);连续给予60天。之后进行为期10天的水迷宫试验:1.训练过程训练周期5 d,每天上下午各一次,训练小鼠从起点到达隐藏平台,60 s/次;如在60 s内未能到达平台,则进行人工引导。在小鼠到达平台后留滞60 s;2.实验过程在训练完成后进行5 d的认知功能测验,将小鼠放入水中,自由游动60 s。在实验过程中,SMART V3.0摄像头自动跟踪。在平台SW区活动度占总活动度的比例(Global Activity in SW(%))、小鼠的逃避潜伏期(Escape latency)、入水到平台时间(Latency to Target)、到平台路径距离(Mean Distance to Target)、第一次到达SW区时间(Latency 1st Entrance to SW)、在SW区滞留时间占总时间的比例(Time in SW(%))、在SW区路径距离占总路径距离的比例(Distance in SW(%))等指标会被SMART V3.0系统跟踪并记录分析。水迷宫试验后处死动物,分离脑组织,进行冠状位行冰冻切片,进行脑组织免疫荧光染色技术。同时提取小鼠脑组织蛋白,检测Aβ1-42,p-tau,BACE-1,TLR-4,p-NF-κB,Arginase,i NOS,PSD95和AMPAR2的蛋白表达情况。几种实验方法结果使用Graphpad Prism5.0软件进行统计学分析处理。结果:1.经WAR5治疗的APP/PS1转基因小鼠的认知能力得到明显提高。与AD组相比,WAR5组小鼠的逃避潜伏期(Escape latency),找到平台的时间(Latency to Target)、在SW区路径距离占总路径距离的比例(Distance in SW(%))、入水到平台时间(Latency to Target)、到平台路径距离(Mean Distance to Target)、第一次到达SW区时间(Latency 1st Entrance to SW)、在SW区滞留时间占总时间的比例(Time in SW(%))比较差异均具有统计学意义(P0.05)。显示出学习和记忆认知能力得到改善。2.WAR5治疗明显降低了小鼠CNS中病理产物Aβ1-42,p-tau,BACE-1的表达。免疫荧光染色可见经WAR5治疗的APP/PS1双转基因小鼠脑组织中Aβ1-42.p-tau表达明显降低;通过Western blot实验结果显示WAR5组Aβ1-42,p-tau和BACE-1蛋白表达比AD组均降低(P0.05,P0.05,P0.05)。3.WAR5降低了CNS中炎性因子及相关因子TLR-4,p-NF-κB和i NOS的表达,增加了Arginase的表达。与AD组相比,经WAR5治疗的小鼠脑组织中炎性因子及相关因子表达明显降低(P0.05,P0.05,P0.05),提示WAR5对脑组织有明显的抗炎抑炎的作用。4.WAR5治疗增加了的表达PSD95和AMPAR2的表达,WAR5治疗组与AD组相比,在CNS中PSD95和AMPAR2因子的表达均增加(P0.05)。结论:通过结果显示了WAR5化合物治疗AD的潜在可能,明显提高AD小鼠的认知能力。WAR5抑制病理产物Aβ1-42,p-tau,BACE-1的表达,降低脑组织中TLR-4,p-NF-κB和i NOS的表达,增加了Arginase的表达,同时增强了PSD95和AMPAR2的表达。WAR5的治疗效果可能是抑制病理产物的产生,降低炎性因子及相关因子TLR-4,p-NF-κB和i NOS的表达,增加了Arginase的表达。增加了PSD95和AMPAR2的表达,最终延缓了疾病的发生发展。
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【学位授予单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R749.16;R-332

【参考文献】