血浆神经来源的外泌体表达蛋白作为阿尔茨海默病早期诊断生物标志物的研究

发布时间：2019-06-15 14:03

【摘要】：目的:1、提取并鉴定人血浆中神经来源的外泌体。2、比较阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)患者与非AD的认知障碍患者神经来源外泌体表达的β淀粉样蛋白1-42(amyloid-β1-42,Aβ1-42)、P-T181-tau和P-S396-tau等蛋白的差异。3、以已验证的生物标记物β淀粉样蛋白(amyloid-β,Aβ)正电子发射断层显像(Positron Emission Tomography,PET)作为标准,分析神经来源外泌体表达蛋白Aβ1-42、P-T181-tau和P-S396-tau的水平对AD诊断的敏感性和特异性。方法:第一部分:连续纳入2015年6月-2016年12月就诊于天津医科大学总医院认知障碍专科门诊的轻度认知障碍(Mild cognitive impairment,MCI)和痴呆患者38例。其中AD组24例(AD痴呆19例,AD所致MCI 5例),男性13例,女性11例,平均年龄65.8±5.72岁,符合2011年NIA-AA的AD诊断标准或AD所致MCI诊断标准;非AD组14例(非AD所致MCI 7例和额颞叶痴呆(frontotemporal dementia,FTD)7例),男性8例,女性6例,平均年龄66.4±5.14岁。所有受试者留取外周血标本5ml,以ExoQuick试剂提取出外泌体,用L1细胞粘附分子(L1 cell adhesion molecule,L1CAM)生物素化抗体分离出神经来源的外泌体。分别用透射电镜和Nanosight NS500纳米颗粒分析仪鉴定提取的外泌体。应用双抗原夹心酶联免疫吸附法(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测AD组和非AD组的外泌体标记蛋白CD81,以及Aβ1-42、P-T181-tau和P-S396-tau蛋白的表达水平。以CD81对外泌体表达蛋白进行标准化处理,分别比较两组Aβ1-42、P-T181-tau和P-S396-tau浓度的差异。第二部分:以视觉分析法分析两组受试者PiB PET的图像,其定性结果作为标准,分别分析血浆神经来源的外泌体表达蛋白Aβ1-42、P-T181-tau和P-S396-tau对AD诊断的敏感性和特异性。结果:1、通过透射电镜观察到提取的神经来源外泌体呈大小均一、杯状或双凹圆盘状的直径在63-115nm的膜性微囊泡结构,可分散或聚集分布。经Nanosight NS500和Nanoparticle Tracking Analysis(NTA)软件进行分析,AD(n=3)组和非AD(n=3)组其浓度分别为1.09±0.024×109/ml和0.98±0.067×109/ml,提取的外泌体浓度无统计学差异(P0.05)。以CD81的浓度进行标准化后,AD组外泌体表达的Aβ1-42的相对浓度(10.52±3.87pg/ml)显著高于非AD组(6.76±1.67pg/ml),P0.05;P-T181-tau的相对浓度(105.18±28.96pg/ml)显著高于非AD组(58.93±16.45pg/ml),P0.05;P-S396-tau的相对浓度(7.91±2.67pg/ml)显著高于非AD组的相对浓度(4.57±1.01pg/ml)差异有统计学意义,P0.05。2、以PiB PET的定性结果作为标准,血浆神经来源的外泌体蛋白Aβ1-42、P-T181-tau和P-S396-tau的水平作为AD诊断的标志物作ROC曲线。ROC结果显示Aβ1-42诊断AD的曲线下面积0.801(95%CI:0.661~0.941),阈值为8.03pg/ml,敏感性85%,特异性67.89%;P-T181-tau诊断AD的曲线下面积0.917(95%CI:0.831~1.0),阈值为80.10pg/ml,敏感性100%,特异性77.78%;P-S396-tau诊断AD的曲线下面积0.839(95%CI:0.713~0.965),阈值为6.59pg/ml,敏感性100%,特异性为66.67%。结论:1、以免疫沉淀的方法可从外周血中获得浓度相对稳定的神经源性外泌体。2、AD患者外周血神经源性外泌体表达的Aβ1-42、P-T181-tau和P-S396-tau浓度较非AD的认知障碍患者明显升高。3、神经源性外泌体表达的Aβ1-42、P-T181-tau和P-S396-tau对AD诊断的特异性和敏感性均较高,有望成为AD早期诊断的生物标记物。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R749.16

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本文编号：2500272