银杏内酯A防治阿尔茨海默病作用及机制研究

发布时间：2019-07-29 12:49

【摘要】：阿尔茨海默病(Alzheimer's disease, AD)是一种发生于老年或老年前期的中枢神经系统退行性病变疾病,以进行性的记忆认知障碍、人格改变为主要特征,其典型的病理变化包括p-淀粉样蛋白(Aβ)沉积、Tau蛋白异常过度磷酸化、皮层与海马组织广泛神经元丢失。随着全球老龄化的进程,其发病率日益增加,给家庭和社会带来了沉重的负担,AD已成为当今神经科学及老年医学备受关注的研究课题,开发AD治疗药物、探讨分子作用机制迫在眉睫。 目的： (1)检测银杏内酯A对N2a细胞的毒性以及对冈田酸(OA)诱导的N2a细胞凋亡的保护作用。 (2)探讨银杏内酯A对OA诱导的N2a细胞Tau蛋白磷酸化水平和PI3K-Akt通路的影响。 (3)研究银杏内酯A对Ap诱导的拟AD小鼠脑神经元损伤及Tau蛋白异常磷酸化的影响。 方法： (1)以鼠成神经母细胞瘤细胞(N2a)为对象,MTT法检测不同剂量的银杏内酯A对N2a细胞的毒性以及对冈田酸(OA)诱导的N2a细胞死亡的保护作用；吖啶橙/溴化乙锭(AO/EB)双染荧光显微镜法观察银杏内酯A对OA作用下的N2a细胞的保护作用;Annexin V-FITC/PI双染法流式细胞术检测银杏内酯A对OA诱导的N2a细胞凋亡的影响。 (2)使用OA干预N2a细胞生长,诱导细胞Tau蛋白过度磷酸化,银杏内酯A药物处理后,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测N2a细胞裂解物中总P-Tau的含量,蛋白免疫印迹法(western blot)检测p-Tau、p-GSK3β、p-PI3K及p-Akt的表达。 (3)Aβ1-40脑内海马单侧注射建立拟阿尔茨海默病(AD)动物模型,观察拟AD小鼠行为学改变；ELISA和western blot检测小鼠海马组织中Tau蛋白磷酸化水平,HE染色法观察小鼠脑神经细胞病理形态变化。 结果： (1)不同浓度的银杏内酯A(10-4-10-7M)处理细胞24小时后,浓度依赖性地阻止了OA诱导的细胞活力下降；与正常对照相比,OA模型组细胞凋亡及坏死数量明显升高,不同浓度银杏内酯A作用后的细胞凋亡和坏死状况有所改善,且银杏内酯A高剂量组(10-4M)细胞几乎恢复至正常状态,表明银杏内酯A对OA诱导的细胞凋亡具有保护及改善作用。 (2)低剂量银杏内酯A(10-7M)效果不明显,但随着银杏内酯A浓度的增加,Tau蛋白异常磷酸化显著改善,GSK-3β Ser9位点的丝氨酸残基磷酸化也得到抑制,同时PI3K和Akt的Tyr508和Ser473位点被磷酸化。 (3)与模型组相比,银杏内酯A处理的拟AD小鼠Tau蛋白磷酸化水平有所下降,神经元的数量显著增多,形态也比较完整,银杏内酯A可以对抗由Ap诱导引起的毒性作用。 结论： 神经细胞凋亡是AD发生过程中的一个重要机制,研究发现银杏内酯A对OA诱导的N2a细胞凋亡具有一定程度的保护作用；NFTs是AD患者脑内典型的病理特征之一,异常磷酸化Tau蛋白是其主要组成成分,实验结果显示银杏内酯A能够剂量依赖性的改善Tau蛋白异常磷酸化,其机制可能是PI3K-Akt信号通路的激活；另外,拟AD小鼠实验结果表明银杏内酯A对Aβ造成的神经毒性和Tau蛋白磷酸化有显著的抑制作用。
【学位授予单位】：安徽大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R749.16

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本文编号：2520513