人TNFAIP1基因的启动子分析及其在阿尔茨海默病中的作用

发布时间：2020-03-21 22:42

【摘要】：第一部分人TNFAIP1基因启动子分析 TNFAIP1基因最开始是在内皮细胞中用TNFα诱导时发现的一个即刻反应基因,后来发现它能够被IL6,LPS,EGF,ceramide,Amyloidbeta等等诱导表达,说明该基因在转录水平上受到了严格的调控,但是对它的表达调控机制研究很少。为了进一步了解该基因的转录调控机制,我们克隆了它5'端侧翼序列的启动子区。利用构建一系列的缺失突变载体和荧光素酶活性分析试验我们鉴定出该基因的基本启动子区,并利用生物信息学软件分析以及定点突变等方法鉴定出SP1转录因子的结合位点对于该基因启动子的基础转录很重要,接下来我们进一步通过电泳迁移率变动实验,染色质免疫沉淀技术和过表达实验等在体内和体外都证实SP1蛋白能够和TNFAIP1基因启动子区的SP1结合位点直接结合,并在过表达SP1蛋白的情况下能够增强TNFAIP1的启动子活性。这样,我们成功的克隆了TNFAIP1的启动子并鉴定出它的基本启动子区,并且通过多种实验证明了它的SP1结合位点对于TNFAIP1启动子的基础表达的重要性,为进一步研究TNFAIP1基因的转录调节和功能研究打下了基础。第二部分人TNFAIP1基因在阿尔茨海默病中的作用最近Link等人报道在转基因线虫阿尔茨海默病模型中TNFAIP1同源基因显著上调,并且发现TNFAIP1基因在尸检的病人脑部病变最轻的部位高表达,猜测TNFAIP1基因有可能起神经保护的作用。在小鼠胚胎中我们用原位杂交和免疫组化的实验发现TNFAIP1在小鼠胚胎整个大脑都有表达,并且在原代培养的海马神经细胞的胞体,轴突和树突都有表达。因为TNFAIP1相互作用蛋白RIN3,ITSN2,RhoB和mDia等都和细胞受体内吞相关,因此检测了TNFAIP1和NMDA受体各个亚基在细胞内的共定位情况,发现TNFAIP1和NMDA受体NR2B亚基在Hela细胞中存在部分共定位。转录因子CREB是形成新的神经突触所必需的,对于长期记忆的形成非常重要。我们利用荧光素酶活性分析实验,发现在HEK293细胞中过表达TNFAIP1可以增强CREB的转录活性。另外我们在用高K+处理HEK293细胞时,发现过表达TNFAIP1能够增强CREB133位点的磷酸化,提示TNFAIP1可能是通过增强CREB133位点的磷酸化调控CREB的转录活性的。综合以上结果我们猜测TNFAIP1可能在AD的发病过程中起着一定的保护作用。
【学位授予单位】：湖南师范大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2009
【分类号】：R749.16

【参考文献】