【摘要】：目的:探究在阿尔茨海默病(AD)大鼠脑内共同移植嗅鞘细胞(OECs)和神经干细胞(NSCs),OECs在脑内对NSCs的增殖和定向分化的影响,为干细胞脑移植治疗AD提供新的理论依据。 方法: 1.从新生5-7d大鼠嗅球分离培养嗅鞘细胞,进行细胞纯化和鉴定。 2.从新生24h内大鼠海马内分离培养神经干细胞,形成原代克隆神经细胞球后传代培养,以免疫细胞化学法和免疫荧光法进行鉴定,移植前使细胞被5-嗅脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)标记。 3.大鼠立体定位仪下将Aβ1-42注入大鼠海马CA1区制备成AD大鼠模型,应用Morris水迷宫和病理学HE染色进行模型鉴定。 4.将生理盐水,NSCs和NSCs+OECs分别注射入AD模型大鼠海马CA1区,分别于移植7d,14d,21d和28d后,对大鼠学习记忆能力进行Morris水迷宫行为学检测,并行大鼠脑组织切片免疫组织化学染色检测BrdU,神经元特异性烯醇化酶(NSE)和胆碱乙酰转移酶(ChAT)阳性表达情况,分析移植细胞在AD大鼠脑内的增殖和定向分化情况。 结果: 1.嗅鞘细胞培养4-7d时突起逐渐变长,主要二至三极的细胞,呈NGFRp75和GFAP免疫细胞化学染色阳性,纯度可至90%以上。 2.神经干细胞原代培养7d时会形成较大的神经细胞球,分离传代后,经Nestin和BrdU免疫荧光染色,细胞呈阳性染色,经免疫细胞化学染色呈NSE,GFAP和ChAT阳性染色。 3.造模后大鼠行动减少,水迷宫检测逃避潜伏期和穿越平台次数较造模前明显减少(P㩳0.01),学习记忆能力显著降低,HE染色显示细胞罗列层次减少,细胞杂乱,部分细胞核固缩深染。 4.细胞移植后实施Morris水迷宫行为学检测,从14d时间点开始,神经干细胞移植组大鼠的平均逃避潜伏期则显著低于盐水组(P㩳0.01),联合移植组的各时间点的平均潜伏期均明显低于盐水组,21d和28d联合移植组的平均潜伏期明显低于神经干细胞移植组,提示学习记忆能力开始得以恢复。 5.细胞移植后脑组织切片免疫组织化学染色显示,联合移植的细胞存活数量明显高于NSCs独立移植的数目(P㩳0.01)。各时间点间比较,NSCs独立移植组的细胞存活数、NSE阳性细胞数和ChAT阳性细胞数差异不显著,7d,14d和21d联合移植组的细胞数量、NSE阳性细胞数和ChAT阳性细胞数增长趋势显著,差异具有显著性统计学意义(P㩳0.01),21d-28d增长趋势变缓(P㩳0.05)。 结论: 1.从新生大鼠海马和嗅球分别分离培养的神经干细胞和嗅鞘细胞共同移植到AD大鼠脑内,嗅鞘细胞能够促使神经干细胞存活,增殖和向胆碱能神经元分化。 2.嗅鞘细胞和神经干细胞联合移植能够明显提高AD模型大鼠的学习和记忆能力。
【学位授予单位】：佳木斯大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2011
【分类号】：R749.16
【参考文献】
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