Macelignan对阿尔茨海默病作用机制的实验研究

发布时间：2020-05-01 02:28

【摘要】： 阿尔茨海默病(Alzheimer's disease，简称AD)是病因未明的原发性神经退行性疾病(neurodegenerative disease)，可以导致学习和记忆力的下降。Macelignan为从印度尼西亚的植物Myristica fragrans Houtt(Myristicaceae)提取的天然的、无毒副作用的单体成分。传统上，Myristica fragrans Houtt用于食物佐料和治疗龋齿等牙病上。本研究为了探讨Macelignan对阿尔茨海默病的作用机制，采用分子生物学技术、神经行为学和免疫组织化学方法，为天然药物Macelignan的开发和应用提供了有效的实验和理论依据。 本实验在体外运用Western blot技术检测了脂多糖和Macelignan对诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、环氧合酶2(COX-2)、磷酸化的p38、p38、cAMP应答元件结合蛋白(CREB)、核转录因子kB p65(NF-kB p65)等蛋白表达的影响，探讨其神经炎症病变的细胞内信号传导途径和Macelignan在谷氨酸的细胞毒性作用下的神经保护作用。在体外实验基础上，动物第四脑室内注入脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)制备老年痴呆动物模型，术后给予Macelignan(10mg／kg／日)灌胃，利用Morris水迷宫测试方法检测了脂多糖和Macelignan对Fischer-344大鼠空间学习记忆的影响，并运用免疫组织化学方法检测所制备的动物模型的脑病理变化。 本研究的主要实验结果： 1．各浓度组Macelignan处理神经小胶质细胞BV2细胞后，利用WST-8试剂盒检测了其细胞生存率变化，与对照组之间无显著性差异。 2．倒置显微镜观察结果表明，用5μg／ml谷氨酸处理的BV2细胞发生肿胀，，细胞间接触稀疏，增殖减慢，细胞周围碎片增多。而Macelignan—谷氨酸复合处理组细胞生长旺盛，细胞间结构紧密，与对照组细胞无形态上的差异。 3．Western blot检测验结果表明，Macelignan可以抑制脂多糖所诱导的iNOS、COX-2、磷酸化的p38和CREB等蛋白的表达，LPS组与对照组之间、Macelignan组与LPS组之间有显著性差异，P＜0.05。 4．Western blot检测结果表明，LPS与Macelignan对各组之间NF-kBp65表达无显著性差异。 5．动物神经行为学测试结果，Macelignan可以抑制LPS所导致的逃避潜伏期的延长，第三个循环开始LPS模型组与对照组之间(P＜0.01)、Macelignan组与LPS模型组之间有显著性差异(P＜0.05)。Probe检测结果，Macelignan组与LPS组在藏有平台的1／4象限内游泳的时间有显著性差异(P＜0.05)。 6．免疫组织化学检测结果，Macelignan可以抑制LPS所诱导的被OX-6染色的活化的小胶质细胞。 以上结果提示： 1．Macelignan在体内可以抑制LPS所诱导的动物的空间学习和记忆功能的损害，并抑制了谷氨酸的细胞毒性作用，具有神经保护作用。 2．Macelignan在体内可以抑制LPS所诱导的小胶质细胞的活化，并抑制了BV2细胞在LPS诱导下产生的COX-2的表达，对神经退行性疾病具有抗炎作用。 3．Macelignan抑制了BV2细胞在LPS诱导下产生的iNOS的表达，具有很好的抗氧化作用。 4．Macelignan抑制了BV2细胞在LPS诱导下产生的p-p38、CREB的表达。LPS和Macelignan是通过作用于MAPK信号通路调节炎症介质的产生。 5．Macelignan不通过NF-kB信号通路调节炎症介质的产生。 6．Macelignan作用于神经小胶质细胞，具有抗炎、抗氧化作用及其神经保护作用，具有很好的开发潜能。
【学位授予单位】：延边大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2007
【分类号】：R749.16

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本文编号：2646453