长期压力刺激通过CRFR1促进伏隔核内DA信号调节异常导致食物成瘾的研究

发布时间：2020-05-09 18:45

【摘要】：目的:观察长期彩光压力刺激能否促进食物成瘾的发生,探索其相关机制。方法:第一部分实验中,根据是否给予高脂食物和彩光压力刺激,将32只C57小鼠分为对照组、高脂食物组、彩光压力刺激组、彩光刺激和高脂食物联合诱导组,分别于夜周期第6-8小时给予相应处理,连续诱导1个月。1个月后分别检测各组小鼠摄食行为、焦虑样行为、体重,依据上述指标对各组食物成瘾评分进行评估。各组小鼠处死后利用q PCR的方法检测各组伏隔核内CRFR1受体、多巴胺D1受体、多巴胺D2受体m RNA表达。第二部分实验中,将30只C57小鼠分为过表达组、干扰组、对照组,根据分组向各组小鼠伏隔核内立体定向注射AAV-CRFR1、AAV-Sh CRFR1、AAV-NC病毒载体,同第一部分实验方法诱导一个月。一个月后测量各组摄食行为、焦虑抑郁样行为、体重,各组处死后利用q PCR的方法检测各组伏隔核内CRFR1受体、多巴胺D1受体、多巴胺D2受体m RNA表达。结果:第一部分实验中,各组在不同实验条件下诱导一个月后,高脂组、联合诱导组小鼠较对照组2小时摄食量、24小时摄食量逐渐增加,且禁食后摄食量明显增加。联合诱导组强迫进食量明显高于对照组和高脂组。彩光组、联合诱导组小鼠焦虑样行为中矿场中央区滞留时间明显下降,联合诱导组组小鼠高架十字开放臂滞留时间、黑白箱穿梭实验中白箱滞留时间较对照组明显下降。联合诱导组组食物成瘾评分指数和体重增长率明显高于对照组和高脂组。q PCR结果提示联合诱导组组小鼠伏隔核Dopr2和CRFR1表达明显增加。第二部分实验中,摄食行为测试中发现,伏隔核过表达CRFR1后,过表达组小鼠2小时摄食量、24小时摄食量逐渐增加,对高脂食物的摄食动机增加,焦虑样行为中中矿场央区滞留时间、黑白箱穿梭实验白箱滞留时间、开放臂滞留时间均下降;过表达组小鼠食物成瘾评分增加,而体重增长增加。而敲除CRFR1后,干扰组小鼠摄食量下降,对高脂食物的摄食动机下降,禁食后摄食量下降,强迫摄食量下降,食物成瘾评分降低,体重降低。q PCR结果发现过表达后多巴胺D2受体表达增加,而敲除后多巴胺D2受体表达下降,多巴胺D1受体无明显影响结论:长期压力刺激可促进食物成瘾,其机制可能与伏隔核内CRFR1和Dopr2表达增加有关。
【图文】：

信号通路,食物,选择性,病毒

是调节皮质、丘脑谷氨酸信号和多巴胺信号的主要途径[16]。Dopr1 受体通路增加树突兴奋性，而 Dopr2 受体降低树突兴奋性[16]。在严重的肥胖症患者中食物成瘾的比例高达 57%[4]，他们伏隔核的 Dopr2 受体明显下降，且与 BMI 指数成反比[17]，敲除纹状体内 DR2 基因可加速诱导出成瘾性摄食行为[18]。此外，Dopr1 及其 PKA-Rap1-MAPK1/3 通路与奖赏系统调节异常有关[19]，可能参与食物成瘾的形成。而 CRFR1 受体是调节压力刺激下多巴胺信号的重要途径。在伏隔核内 CRFR1 主要分布于其多棘突神经元的突触前膜和突出后膜的胞体，参与调节中脑被盖腹侧区（VTA）的多巴胺神经元突触末梢多巴胺的释放，CRFR1 激活使多巴胺神经元激活，伏隔核内多巴胺释放增加[13]。Dopr2 受体激活 PKA-IP3 通路，激活钙离子通道，此外D2受体激活可引起cAMP水平下降[16]，而CRFR1受体激活cAMP-PKA通路，激活后 cAMP 升高[12]，，可以选择性阻断 CaV3.2 T 型钙离子通道[20]，因此可阻碍 D2受体的功能。故 CRFR1 可以降低多巴胺 D2 受体通路的敏感性。综上，我们推测长期慢性的压力刺激下 CRFR1 信号通路调节的失代偿导致多巴胺信号调节受损，这一结果导致了多巴胺受体对多巴胺信号调控的异常，这种改变可能是诱发食物成瘾的相关机制。

过表达,病毒,质粒,载体

CACAGCCATCGTACTCACGTACTCCACCGACCGTCTATCGGCTGGGGTGTGCCTTTCCCCATCATTGTGGCTTACGACAATGAAAAGTGCTGGTTTGGCAAACGTCCTACCAGGGCCCCATGATCCTGGTCCTGCTGATCAACCGCATCCTCATGACCAAACTCCGAGCATCCACCACAAGGCTGTGAAGGCCACTCTGGTGCTCTTGCCCCTCTCTTCGTCAACCCTGGGGAGGACGAGGTCTCCAGGTTTCCTGGAGTCCTTTCAGGGCTTCTTCGTGTCTGTGAGGTCCGCTCTGCCATCCGGAAGAGGTGGCGGCGAGAGCCCGAGTGGCCCGCGCCATGTCCATCCCCACCCACAGCATCAAGCAGTCCACAGCAGTG病毒质粒结构分别可见图-2 和图 3
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R749.99

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