阿尔茨海默病区域选择性损伤的机制研究和治疗新策略

发布时间：2020-06-18 08:43

【摘要】： 目的 以阿尔茨海默病区域选择性损伤的内在机制为出发点,探讨小脑神经元代谢物对大鼠和转基因小鼠大脑皮层和海马区β淀粉样蛋白(β-Amyloid, Aβ)含量的影响及可能的作用机制,同时探讨不同脑区PPARγ活性差异在阿尔茨海默病区域选择性损伤中的作用及作用机制,并由此提供一种治疗阿尔茨海默病的新思路。 方法 利用脑立体定位仪第四脑室抽取小脑脑脊液或通过细胞培养收集并浓缩小脑条件培养基,注射到大鼠及转基因小鼠的侧脑室内,饲养一周后,断头法处死取海马及皮层组织,通过免疫组织化学、荧光染色和酶联免疫吸附试验检测大脑皮层和海马区的Aβ含量和Aβ斑块沉积量,并用Western Blot的方法检测胰岛素降解酶(insulin-degrading enzyme, IDE)和中性内肽酶(neprilysin, NEP)的表达情况。 同时,利用脑立体定位仪向APP/PS1转基因小鼠的第四脑室中注入PPARγ抑制剂GW9662,饲养一周后进行行为学检测,然后断头法处死取海马及皮层组织,通过酶联免疫吸附试验、荧光染色和免疫组织化学检测小脑Aβ含量和Aβ斑块沉积量,并用Western Blot的方法检测胰岛素降解酶(insulin-degrading enzyme, IDE)的表达情况。 结果 大鼠小脑脑脊液自体输入减少其海马区Aβ斑块沉积,降低其大脑皮层中可溶性和不可溶性Aβ的含量,并上调大鼠大脑皮层区IDE的表达;小脑条件培养基中的小脑神经元代谢物可以促进神经元对Aβ的清除,并降低APP/PS1转基因小鼠皮层和海马中的Aβ含量和斑块沉积量,改善APP/PS1转基因小鼠的学习记忆能力,同时使得海马神经元IDE及NEP的表达量增加。另外,小脑脑脊液中的小脑神经元代谢物同样也能降低APP/PS1转基因小鼠皮层和海马中的Aβ含量和斑块沉积量,并改善APP/PS1转基因小鼠的学习记忆能力。 此外,抑制APP/PS1转基因小鼠小脑的PPARγ活性可以显著增加其小脑可溶性Aβ和不可溶性Aβ的含量,增加小脑Aβ斑块沉积量,并使得APP/PS1转基因小鼠的运动协调功能发生障碍;同时,小脑IDE的表达存在显著下调。 结论 小脑神经元代谢物可以降低大鼠及APP/PS1转基因小鼠大脑皮层和海马区内的Aβ含量及改善APP/PS1转基因小鼠的认知障碍。这种保护作用是通过上调IDE和NEP的表达来实现的;并且小脑PPARγ的高活性对于ΑD的病理损伤也具有抵抗作用,这种保护作用可能是通过上调IDE的表达、增加Aβ的降解从而实现小脑对AD病理损伤抵抗的。以上研究结果为阿尔茨海默病区域选择性损伤的机制做出了积极的探索,并为阿尔茨海默病的临床治疗提供了一个新的思路。
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2010
【分类号】：R749.1
【图文】：

16图3.1.1 大鼠小脑脑脊液自体输入减少其海马区Aβ斑块沉积 。（A）免疫组织化学显示大鼠海马区Aβ斑块沉积。红色箭头所示为对照组Aβ斑块的褐色沉积（×100，苏木精染色）；（B）ImageJ 软件定量分析免疫组织化学切片上Aβ斑块的光密度值。与对照组相比，差异有统计学意义。*P < 0.05。Fig 3.1.1 Auto-transplantation of cerebellar cerebrospinal fluid reduced the deposition of Aβ inhippocampus on rat.(A) Immunohistochemistry showed: the deposition of Aβ plaque in the experimental group andcontrol group. Red arrow indicates : Red arrow indicated the deposition of Aβ. (×100, dyed byhematoxylin) (B) Aβ plaque in Immunohistochemistry slices was quantified using ImageJ Software.Asterisk indicated statistically significant (*P < 0.05).3.1.2 大鼠小脑脑脊液自体输入降低其大脑皮层中可溶性和不可溶性 Aβ的含量ELISA 结果显示，实验组大鼠大脑皮层接受自体小脑脑脊液注射后，其可溶性 Aβ 含量(图 3.1.2A)和不可溶性 Aβ 含量(图 3.1.2B)均明显低于对照组，差异有统计学意义(P < 0.05)。(B)

脑脊液自体输入减少其大脑皮层中可溶性和不可溶性 Aβ显示大鼠接受自体小脑脑脊液输入后其大脑皮层中 (A) 含量。与对照组相比，差异有统计学意义。*P < 0.05。ansplantation of cerebellar cerebrospinal fluid decreasedl in cerebral cortex on rat. indicated: the level of Aβ in the experimental group and contrd statistically significant (*P < 0.05).脑脊液自体输入上调大鼠大脑皮层区 IDE 的表达lot 结果显示：实验组大鼠大脑皮层接受自体小脑脑平较对照组明显升高。差异有统计学意义(P < 0.0

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本文编号：2718994