β片层阻断肽H102对AMPK-mTOR自噬相关通路的影响

发布时间：2020-06-26 10:07

【摘要】：目的:观察H102对APP/PS1双转基因AD小鼠AMPK-mTOR自噬相关通路中相关蛋白表达及学习记忆能力的影响,探讨H102是否可以通过AMPK-mTOR自噬相关通路清除Aβ。方法:1.将30只六月龄的APP/PS1 AD小鼠随机分为两组,每组15只,将同背景同月龄15只C57BL/6J正常雄性小鼠设为对照组。均在SPF级动物中心饲养和给药,H102给药干预组的小鼠每天同一时间段经鼻腔给予H102溶液5μl(5.8mg/kg),对照组和AD组小鼠每日给予同剂量的的辅料溶液。持续不间断的给药30天后进行水迷宫和新物体识别实验,测试三组小鼠的学习记忆能力。2.行为学实验结束后,25%的乌拉坦(4 ml/Kg)腹腔注射麻醉,磷酸盐缓冲液心脏灌流,断头冰上取脑,一半脑组织取出后放入4%的多聚甲醛中,用于石蜡包埋、切片,用免疫组化方法来检测p-AMPK、p-mTOR、p-ULK1、P62、LC3Ⅱ/Ⅰ、Aβ蛋白的表达;另一半脑组织将海马与皮层分离单独包装暂时放入液氮中冷却,后集中放入-80℃冰箱里保存,用Western blot方法检测p-AMPK、p-mTOR、p-ULK1、P62、LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白的表达,用ELISA检测方法检测Aβ蛋白的表达。结果:1.定位航行实验:AD组小鼠的逃避潜伏期与正常对照组小鼠相比,显著增加(P0.05);H102组小鼠的逃避潜伏期与AD组小鼠相比显著减少(P0.05);与正常对照组相比,H102组小鼠的逃避潜伏期无显著性差异(P0.05)。2.空间探索实验:与正常对照组小鼠相比,AD组小鼠在第一象限停留的时间显著缩短(P0.05),跨越隐匿平台的次数显著减少(P0.05),初始角显著增大(P0.05);H102组小鼠在第一象限停留的时间及跨越隐匿平台的次数与AD组小鼠相比显著增加(P0.05),初始角与AD组小鼠相比显著减小(P0.05);与正常对照组相比,H102组小鼠在第一象限停留的时间、跨越隐匿平台的次数、初始角均无显著性差异(P0.05)。3.新物体识别实验:AD组小鼠新物体识别指数(RI)与正常对照组小鼠相比明显降低(P0.05);H102组小鼠RI与AD组小鼠相比较显著提高(P0.05);与正常对照组小鼠相比较,H102组小鼠RI无显著性差异(P0.05)。4.免疫组织化学检测:与正常对照组相比,AD组小鼠脑组织中p-AMPK、p-ULK1、LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白的表达显著降低(P0.05),p-mTOR、P62蛋白表达显著升高(P0.05);与AD组小鼠相比,H102组小鼠脑组织中p-AMPK、p-ULK1、LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达显著升高(P0.05),p-mTOR、P62蛋白表达显著降低(P0.05);与正常对照组小鼠相比,H102组小鼠脑组织中p-mTOR蛋白显著降低(P0.05),LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达显著升高(P0.05),p-AMPK、p-ULK1、P62蛋白的表达量均无统计学意义(P0.05)。5.Western blot检测:与正常对照组相比,AD组小鼠脑组织中p-AMPK、p-ULK1、LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白的表达均显著降低(P0.05),p-mTOR、P62蛋白表达显著升高(P0.05);与AD组小鼠相比,H102组小鼠脑组织中p-AMPK、p-ULK1、LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白的表达均显著升高(P0.05),p-mTOR、P62蛋白表达显著降低(P0.05);与正常对照组小鼠相比,H102组小鼠脑组织中LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达显著升高(P0.05),H102组小鼠海马中p-mTOR蛋白表达与正常对照组小鼠相比显著降低(P0.05),皮层中p-mTOR蛋白表达与正常对照组小鼠相比无显著性差异(P0.05),H102组小鼠脑组织中p-AMPK、p-ULK1、P62蛋白的表达与正常组相比均无显著性差异(P0.05)。6.Aβ蛋白检测结果:免疫组化和ELISA检测结果均表明,AD组小鼠脑组织中Aβ蛋白的表达量与正常对照组小鼠相比,显著升高(P0.05);与AD组小鼠相比,H102组小鼠脑组织中Aβ蛋白的表达量显著降低(P0.05);与正常对照组小鼠相比,H102组小鼠脑组织中Aβ蛋白的表达量无显著性差异(P0.05)。结论:β片层阻断肽H102可能通过AMPK-mTOR自噬通路促进脑内Aβ的清除,提高小鼠的学习记忆能力。
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R749.16
【图文】：

天津医科大学硕士学位论文实验结果见图 1.1、表 1.1、和图 1.2 所示，实验数据表明，经过五天的游泳训练，三组小鼠的平均逃避潜伏期的时间均有缩短，但程度不同，正常对照组与H102 干预组的时间缩短更为明显。AD 组小鼠的平均逃避潜伏期与正常对照组相比，时间显著延长（P<0.05），H102 组小鼠的平均逃避潜伏期与 AD 组小鼠相比，时间显著缩短（P<0.05），与正常对照组相比，H102 组的平均逃避潜伏期差异无统计学意义（P>0.05）。

图 1.2 各组小鼠定位航行实验平均逃避潜伏期的比较与正常组比较：*P<0.05；与 AD 组比较：#P<0.051.2.2 空间探索实验结果表 1.2 Comparison of RFQ in the space exploration experiment, the number of timesacross the hidden platform, and the orientation angle of the water in each group（n=15, x ±s）Group RFQ(S) 跨越隐匿平台次数（次/90 s）入水朝向角（°）control 29.84±2.21 2.57±0.17 42.98±4.93AD 16.07±3.53*0.67±0.12*74.49±6.09*H102 24.48±1.68＃1.69±0.32＃50.39±5.04＃*P<0.05 vs control;#P<0.05 vs AD（1） 第一象限停留时间（RFQ）的比较

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本文编号：2730163