辛伐他汀对伴高脂血症的阿尔茨海默病双转基因小鼠作用研究

发布时间：2020-07-07 09:22

【摘要】：目的:阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)是一种进行性神经系统变性疾病,临床主要表现为进行性记忆减退和认知障碍。AD的病理表现主要是细胞外淀粉样蛋白沉积(amyloidβ,Aβ)、神经纤维缠结和神经元丢失。目前大量流行病学资料显示高脂血症可能与AD的发病相关,高脂高胆固醇血症已成为一个公认的AD危险因子,在最新的体外实验中,激活核受体PPARγ能下降细胞内胆固醇水平,并因此抑制β,γ分泌酶的活性。本实验目的在于讨论在伴高脂血症的阿尔茨海默病双转基因小鼠动物模型中辛伐他汀是否发挥保护作用以及辛伐他汀是否通过改变核受体的表达调节胆固醇,进而影响Aβ的产生,并为临床应用他汀类药物治疗AD提供理论依据。方法:本实验建立了不同血胆固醇浓度梯度的APPswe/PS1dE9双转基因小鼠模型:阴性对照组、高脂阴性组、阳性组、阳性辛伐他汀组、高脂阳性组、高脂阳性辛伐他汀组。分别给予高脂高胆固醇饲料或正常饲料喂养6个月后给予辛伐他汀(50mg/Kg·天)或安慰剂灌胃3个月,使各组动物出现不同血胆固醇浓度梯度。通过免疫组织化学染色,Thioflavin S染色观察Aβ沉积的变化情况,Morris水迷宫检测小鼠学习、记忆能力,RT-PCR、Western blot方法分别检测PPARγ在mRNA和蛋白水平的表达情况。结果: 1、本实验初步建立了不同血胆固醇浓度梯度的APPswe/PS1dE9双转基因小鼠模型。 2、免疫组织化学染色和ThioflavinS染色显示高脂饲料组较正常饲料组Aβ沉积增多,辛伐他汀处理组较安慰剂对照组Aβ沉积减少,均有显著性差异。辛伐他汀组与对照组小鼠学习、记忆能力未检测出明显差异。 3、RT-PCR结果显示PPARγmRNA表达没有改变,Western blot结果显示辛伐他汀处理组PPARγ蛋白表达增高。结论: 1、通过对不同血胆固醇梯度的转基因小鼠研究,发现胆固醇水平可以影响Aβ的生成,高脂血症可能是AD的危险因素,辛伐他汀可以有效地降低其胆固醇水平,发挥保护作用。 2、辛伐他汀处理后PPARγ表达增高,推测辛伐他汀可能与激动PPARγ有关。 3、辛伐他汀可能通过调节PPARγ的表达改变胆固醇浓度,从而影响Aβ的生成。
【学位授予单位】：大连医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2011
【分类号】：R589.2;R749.16
【图文】：

产物,鉴定结果,片段,PCR扩增产物

图 1 PS DNA 片段 PCR 扩增产物的鉴定结果，阳性产物为 3,4,8,9,10，12；阴1,2,5,6,7,11,13,14；marker：DNA Marker DL2,000，PCR 产物片段为 608bp。2、采用 PCR 法扩增技术，以鼠尾 DNA 为模板，扩增 APP 基因片段1%琼脂糖凝胶电泳分离。结果如图所示，在 377bp 附近有一条明亮的带的基因 APP DNA 片段的预期位置相符。1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 marker1007550

小鼠,免疫组织化学染色,单抗,高脂

三、转基因鼠的 Aβ的表达1、免疫组织化学染色检测 A β 沉积用小鼠抗人 A β(WO-2)单抗对转基因小鼠脑片进行免疫组化染色后，对各鼠 A β 沉积情况进行观察。阴性对照组基本不出现 Aβ 沉积，高脂阴性组与组相比，Aβ 沉积的数量增多，阳性组可见大量 Aβ 沉积沉积，说明转基因鼠较正常同窝阴性对照鼠神经元内 Aβ 沉积增高明显。说明转基因阳性鼠 A表达明显高于同窝阴性对照鼠，在形态学上证明了转入的人基因的高表达。他汀处理的阳性小鼠较阳性小鼠 Aβ 沉积数量减少，高脂阳性小鼠 Aβ 沉积经辛伐他汀处理后的高脂阳性小鼠较高脂阳性小鼠 Aβ 沉积数量减少。从以果可以看出，胆固醇水平可以影响脑内 Aβ 沉积表达水平，经辛伐他汀处理Aβ 沉积均有所减少。

高脂,辛伐他汀,沉积数,阴性

17高脂阳性高脂阳性辛伐他汀图 5 Thioflavin S 染色结果每张片子选取 4 个高倍视野运用 Image-pro Plus 图象分析系统进行图象分分析结果显示，阴性组的 Aβ 沉积数明显低于阳性组，高脂阴性组较阴性组多，阳性辛伐他汀组较阳性组 Aβ 沉积数量减少。高脂阳性组较阳性组 Aβ 明显增多，高脂阳性辛伐他汀组比高脂阳性组减少。说明，高胆固醇增加 Aβ积的数量。辛伐他汀处理减少高脂造成的Aβ沉积增多。均有显著性差异（p<0.与免疫组化结果一致。

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