慢性温和性应激对小鼠海马区Disc1表达的影响

发布时间：2020-07-20 13:30

【摘要】： 前言 抑郁症是精神科常见疾病之一,具有明显的复发倾向或趋于慢性化。应激性生活事件尤其是慢性应激是抑郁症的主要促发因素。慢性应激可引起大脑器质性损害,尤其是海马结构和功能的损害,但其病理生理机制迄今不明。目前有证据表明重性抑郁及双相障碍与精神分裂症享有一些共同的易感基因,包括DISC1。DISC1是一个多功能的蛋白质,越来越多的证据表明DISC1在维持大脑皮层灰质及海马体积和功能功能方面发挥着重要作用。通过与多种蛋白相互作用,其在神经迁移、轴突生长、神经元成熟中起关键作用。本研究通过观察慢性应激抑郁模型小鼠海马Disc1的表达,探讨慢性应激所致抑郁症的发病机制。 材料与方法 1、实验材料 (1)实验动物采用雄性ICR小鼠14只,体重22-25g,由中国医科大学实验动物中心提供。 (2)主要试剂兔抗鼠Disc1抗体(abcam,ab82041)；生物素标记的羊抗兔IgG；SABC免疫试剂盒；DAB显色剂(以上购自武汉博士德公司)；HRP-标记二抗。 (3)实验仪器光学显微镜(OLYMPUS,Japan)；高速冰冻离心机(HITACHI, Japan)；紫外可见分光光度计(HITACHI,Japan)；凝胶成像系统(UVP,U.S.A)；Meta Moph/Cool SnpPfx/Ax70计算机图像分析系统。 2、实验方法 (1)动物分组及模型制作选择蔗糖摄取基线值相近的小鼠,随机分为对照组和实验组,组间无明显统计学差异,各组单笼饲养。 慢性温和性应激共实施5周,每周给予多种不可预测性(伪随机序列)应激,应激源包括：禁食、禁水、空瓶子(2小时)、限制进食(1小时)、频闪(120次/分)、湿笼(垫料中倾倒150ml水)、群养、倾斜45°,每种应激源持续14-16小时。对照组不予任何刺激。应激期间每周一上午测量实验组及对照组小鼠体重。 (2) Disc1的检测实验组1和对照组1的小鼠经多聚甲醛灌流固定后剥离脑制作含海马的石蜡切片。采用特异性抗体的免疫组织化学方法检测海马CA1CA3及齿状回中的Disc1蛋白含量。实验组2和对照组2的小鼠断头处死后剥离海马,采用Western Blotting法测定海马Disc1蛋白的含量。 实验结果 1、糖水消耗实验：实验组糖水消耗量及蔗糖偏爱值较对照组明显减少(P0.01),糖水摄入相对值明显低于对照组(P0.05)。 2、抑郁模型组的小鼠体重显著低于对照组(P0.01)。水平穿越格子数与直立次数实验组小鼠与对照组相比无显著性差异(P0.05)。 3、Disc1的表达：免疫组织化学染色中模型组小鼠海马CA1、CA3和DG区Disc1表达明显低于对照组(P0.05)。Western Blotting实验中模型组小鼠Disc1蛋白含量明显低于对照组(P0.05)。 结论 1、慢性温和性应激抑郁模型实验组小鼠海马Disc1表达水平较对照组增高。 2、Disc1可能参与了慢性应激抑郁小鼠海马神经元可塑性改变的病理生理过程。
【学位授予单位】：中国医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2010
【分类号】：R749.4
【图文】：

对照组与实验组糖水偏爱值的比较(至士:)

应激3周后，实验组小鼠糖水偏爱值明显低于对照组(尸<0.05);应激5周后，实验组糖水消耗量、糖水消耗相对值均明显低于对照组(尸<0.05)，上述变化在后续造模过程中保持恒定。(参见图1一图3)二、体重和旷场行为指标比较慢性应激4周后，实验组小鼠体重比对照组明显下降(尸<0.01);水平穿越格子数与直立次数实验组小鼠与对照组相比无明显差异。(参见图4，表2)三、 westemBlotting法测定小鼠海马组织Discl蛋白表达水平对每个样品的Discl蛋白带进行了IDV值的测定。实验组与对照组比较，实验组DIV值高于对照组，组间差别有统计学意义(尸<0.05)。(见表3，图5，6)四、免疫组化法测定小鼠海马组织Discl蛋白表达水平4实验组和对照组海马各区细胞均有免疫组化反应阳性颗粒分布，阳性表达呈黄棕色。着色部位集中在细胞核

二、体重和旷场行为指标比较慢性应激4周后，实验组小鼠体重比对照组明显下降(尸<0.01);水平穿越格子数与直立次数实验组小鼠与对照组相比无明显差异。(参见图4，表2)三、 westemBlotting法测定小鼠海马组织Discl蛋白表达水平对每个样品的Discl蛋白带进行了IDV值的测定。实验组与对照组比较，实验组DIV值高于对照组，组间差别有统计学意义(尸<0.05)。(见表3，图5，6)四、免疫组化法测定小鼠海马组织Discl蛋白表达水平4实验组和对照组海马各区细胞均有免疫组化反应阳性颗粒分布，阳性表达呈黄棕色。着色部位集中在细胞核，胞浆无着色。实验组小鼠与对照组相比，海马CAI

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本文编号：2763507