CRH介导妊娠期慢性应激致子代雄鼠抑郁

发布时间：2020-07-27 20:51

【摘要】：目的探讨促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)是否介导妊娠期慢性应激致子代抑郁及其可能机制。方法以20天子代雄鼠为研究对象,实验小鼠分为正常对照组(Control组)、产前应激+溶剂对照组(CPS组)、产前应激+CRHR1拮抗剂组(CPS+ANT组)。应用强迫游泳实验、糖水偏好实验和旷场实验对子代雄鼠抑郁程度进行检测。子代雄鼠海马CA3区神经元的形态学变化通过HE染色并在显微镜下观察。子代雄鼠海马m TOR的表达量应用Western blot技术检测。应用RT-PCR技术检测m TOR m RNA水平的变化。子代雄鼠海马CRH水平变化运用ELISA法检测。再以7天子代SD大鼠为研究对象,超净台冰上取脑,体外培养海马脑片,通过培养液里加入和不加入CRH或CRHR1拮抗剂,实验分为正常对照组(Control组)、1.0μM CRH+溶剂对照组(CRH组)、1.0μM CRH+0.1μM CRHR1拮抗剂组(Low组)、1.0μM CRH+1.0μM CRHR1拮抗剂组(Middle组)、1.0μM CRH+10μM CRHR1拮抗剂组(High组)。应用Western blot法检测海马脑片组织m TOR的表达量。结果1.强迫游泳实验显示,与Control组相比,CPS组子代雄鼠不动时间增多(P0.05);与CPS组相比,CPS+ANT组子代雄鼠不动时间减少(P0.05)。2.旷场实验显示,与Control组相比,CPS组子代雄鼠鼠爬行总路程、平均速度、穿越象限次数、站立次数减少(P0.05);与CPS组相比,CPS+ANT组子代雄鼠爬行总路程、平均速度、穿越象限次数、站立次数增加(P0.05)。3.糖水偏好实验显示,与Control组相比,CPS组子代雄鼠糖水偏好率下降(P0.05);与CPS组相比,CPS+ANT组子代雄鼠糖水偏好率增高(P0.05)。4.HE染色实验显示,Control组小鼠海马CA3区神经元染色清晰,数量相对较多,排列紧密整齐,细胞核表现出圆形,核仁较明显;CPS组神经元排列疏松絮乱,数量较少,脱失现象明显,部分细胞核浓染、固缩。CPS+ANT组小鼠海马CA3区神经元染色清晰,数量较多,呈椎体状、圆球状,细胞核呈圆形,核仁明显。用Image-Pro Plus Image分析软件计数海马CA3区神经元总数,结果显示,与Control组(173.00±8.888)相比,CPS组(85.67±8.737)神经元总数明显减少(P0.05);与CPS组相比,CPS+ANT组(171.67±6.506)神经元总数明显增多(P0.05)。5.RT-PCR实验显示,与Control组相比,CPS组子代雄鼠海马m TOR基因m RNA表达差异没有统计学意义(P0.05),CPS+ANT组子代雄鼠海马m TOR基因m RNA表达显著升高(P0.05)。与CPS组相比,CPS+ANT组子代雄鼠海马m TOR基因m RNA表达显著升高(P0.05)。6.WB结果显示,与Control组相比,CPS组小鼠海马组织m TOR表达量减少(P0.05);与CPS组相比,CPS+ANT组小鼠海马组织的m TOR表达量增加(P0.05);Control组与CPA+ANT组小鼠海马组织m TOR表达量无统计学差异。7.RT-PCR实验显示,与Control组相比,CPS组子代雄鼠海马m TOR基因m RNA表达差异没有统计学意义(P0.05),CPS+ANT组子代雄鼠海马m TOR基因m RNA表达显著升高(P0.05)。与CPS组相比,CPS+ANT组子代雄鼠海马m TOR基因m RNA表达显著升高(P0.05)。8.ELISA法检测小鼠海马CRH结果显示,三组子代雄鼠海马CRH浓度差异有统计学意义,与Control组相比,CPS组子代雄鼠海马CRH水平升高(P0.05);与CPS组相比,CPS+ANT组小鼠海马CRH水平降低(P0.05)。9.体外培养海马脑片WB结果显示,与Control组相比,CRH组海马脑片m TOR表达量显著减少(P0.05);与CRH组相比,Low组,Middle组和High组海马脑片m TOR表达量均显著增加,差异有统计学意义(P0.05);Low组,Middle组和High组三组海马脑片m TOR表达量与Control组差异无统计学意义;Low组,Middle组和High组海马脑片m TOR表达量组内比较差异也无统计学意义,但是Middle组海马脑片m TOR表达量有升高趋势。结论CRH介导了妊娠期慢性应激致子代雄鼠抑郁,其机制可能与妊娠期慢性应激致子代海马CRH升高,下调m TOR蛋白表达,进而引起海马CA3区神经元损伤有关。
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R749.4

【参考文献】

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本文编号：2772366