脑小血管病导致的血管性认知障碍与海马区TLR4的相关性

发布时间：2020-07-31 14:42

【摘要】：目的:脑小血管病(CSVD)是神经变性病中最常见的疾病之一,高血压是其主要诱因。CSVD可导致脑白质损伤,认知障碍。Toll样受体4(TLR4)介导的炎症反应参与了CSVD的病理过程,但尚不清楚TLR4在CSVD诱发的血管性认知障碍(VCI)中的作用,本研究以自发性高血压大鼠(SHR)为CSVD模型,探讨VCI与海马区TLR4的相关性及可能机制。方法:15只雄性SHR(实验组)和10只雄性WKY(对照组)大鼠定期监测血压变化,从每隔6周利用水迷宫检测大鼠空间学习记忆能力,直至35周处死。每隔12周股动脉采血分离血清,使用酶联免疫反应吸附试验(ELISA)检测各组大鼠血清中IL-1β、TNF-α表达水平,每隔12周用3.0核磁冠状扫描头颅白质损伤情况,35周时随机取部分大鼠断头取脑,取新鲜海马组织采用Western blotting检测各组海马区TLR4蛋白表达水平,采用RT-PCR技术检测海马区IL-1β、TNF-αmRNA表达,剩余大鼠进行心脏灌注,4%福尔马林(PA)固定大脑,组织制片,草酸铵结晶紫(CV)染色及HE染色观察大脑血管损伤情况,免疫组学及免疫荧光技术检测各组海马CA1区TLR4、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)及小胶质细胞特异性蛋白(Iba1)阳性细胞数。结果:和WKY比较,SHR血压持续维持在较高水平,随着年龄增加出现空间学习记忆下降,血清IL-1β、TNF-α水平升高。头颅冠状扫描,T2加权核磁共振成像(MRI)显示SHR胼胝体及外囊出现高信号。组织学检测发现,35周龄的SHR脑小血管壁增厚,海马区IL-1β、TNF-αmRNA及TLR4蛋白表达升高,海马CA1区TLR4、GFAP、Iba1阳性细胞数增加。结论:高血压导致脑内小血管损伤,部分脑区白质变性,随年龄增加出现不同程度的认知障碍。海马区TLR4高表达及胶质细胞反应是关键机制之一。
【学位授予单位】：甘肃中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R749.13
【图文】：

轨迹图,高血压,不同年龄,大鼠

P<0.05；(D)各组大鼠不同年龄游泳速度，P>0.05；（E）两组大鼠不同年龄空间探索实验穿越平台的次数，P>0.05；（F）两组大鼠不同年龄游泳轨迹图。图1 高血压对SHR空间记忆能力影响

炎症因子,高血压

（A）两组大鼠不同年龄血清 IL-1 水平；（B）两组大鼠不同年龄血清 TNF- 水平；（C）35 周龄两组大鼠海马区 IL-1 、TNF- mRNA 表达水平，*P<0.05,**P<0.01，***P<0.001，n=5 只/组。图 2 高血压对 SHR 炎症因子水平的影响3.高血压对SHR大鼠脑白质和小血管的影响核磁结果显示，SHR大鼠脑部胼胝体及外囊T2加权像出现弥漫性白质高信号且随着年龄增大逐渐增强，我们测得SHR不同年龄胼胝体灰度值有差异性（F=7.319，P=0.046），而WKY未出现明显差异（F=5.429,P=0.073）,与WKY相比，SHR大鼠24周（t=6.639,P=0.003）和35周（t=4.95,P=0.008）脑白质损伤明显，差异有统计学意义。CV染色结果显示，SHR脑小血管壁较WKY相比增厚（t=2.378, P=0.045），使用HE染色结果比较SHR与WKY脑小血管壁厚度，结果与CV染色是一样的(t=2.428,P=0.04)，差异有统计学意义；（图3）。

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