RNAi技术抑制人ZNF313基因的表达遗传多态与阿尔茨海默病的关联研究

发布时间：2020-08-20 18:27

【摘要】：精子发生是一个多阶段,多步骤的持续分化过程,受到位于性染色体和常染色体上的一系列基因的调控。精子发生过程相关基因的研究对深入了解精子发生的分子机理和阐明男性原发不育的遗传病因具有重要的理论和临床意义。 四川大学华西医院医学遗传研究室采用消减杂交、mRNA差异显示、RACE等方法先后克隆了多个与生精过程相关的基因,如:TCP11、ZNF230、ZNF313、ZNF463等基因,其中多个为编码锌指蛋白的基因。人ZNF313基因定位于20q13,编码的228个氨基酸的锌指蛋白,同时含有C_2H_2和C_3HC_4锌指结构域。由于不同的加尾信号产生两个不同长度的转录本,其中750bp的转录本在睾丸组织中高表达,同时也在多种组织中有表达。提示该基因有可能参与了睾丸组织的发育过程,调控了精子的发生。 本文选择了人ZNF313基因为对象,分别用含有U6和H1启动子的两种shRNA表达载体构建了针对人ZNF313基因的五个shRNA重组表达载体。瞬时转染人正常肝HL-7702细胞株后,RT-PCR和蛋白印迹检测结
【学位授予单位】：四川大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2005
【分类号】：R749.16
【图文】：

图1插入片段的基本结构1.3载体的线性化在克隆位点处选择限制性内切酶Xbal和Sall双酶切消化pAV用+627载体。酶切组成:pAV用6+27，10林9/20林l;10xTbu价r，15林l;筋al和aszI(10U单l)，各5卜l;ddHZo，60林l;总体积100林l。37oe水浴4小时。选择限制性内切酶助211和Hindm双酶切消化pSUPE助oe载体。酶切组成:pSUpE助eo，10林g/20“l;10xMueffr，10林l;兔211和Hindlll(10U单l)，各5协l;ddHZO，65林l;总体积100林l。37oe水浴4小时。浓度1%的琼脂糖凝胶电泳分离双酶切产物，在紫外灯下用刀片从琼脂糖凝胶上切下载体片段，然后用QAIGEN公司的QAIuqikc凝胶回收试剂

pAVU/6十27载体图谱

pSUPER载体图谱

【参考文献】

相关期刊论文 前1条

1 马用信,张思仲,吴洽庆,孙岩;人受精促进肽受体基因(TCP11b)的剪接、克隆和差别表达[J];生物化学与生物物理学报;2003年02期

本文编号：2798297