阿尔茨海默症相关基因的克隆和细胞模型的建立

发布时间：2020-08-24 20:15

【摘要】： 阿尔茨海默症(Alzheimer's disease,AD)是患病率最高的老年性神经系统疾病,临床以记忆力、感觉能力、判断力、思维能力、运动能力、情感反应等降低为主。构建阿尔茨海默症的细胞模型对研究其病因、病理过程以及筛选防治阿尔茨海默病的新药具有重要作用。本研究使用RT-PCR的方法从人神经细胞中克隆了多个AD相关基因。在此基础上用pcDNA3.1真核表达载体经脂质体转染U251细胞、G418筛选后获得了APPsw(Lys595Asn,Met596Leu)和野生型BACE1转染的稳定表达细胞株。基因组DNA PCR、RT-PCR和Western blot结果表明目的基因转染成功并在mRNA和蛋白质水平稳定表达,APPsw蛋白和BACE1蛋白表达对U251细胞形态无明显影响,APPsw(Lys595Asn,Met596Leu)转染后APP蛋白和Abeta的表达量与对照组相比明显增多,BACE1转染组的Abeta产量明显增多。本研究结果将为以后深入研究阿尔茨海默症分子机制和药物筛选奠定实验和物质基础。
【学位授予单位】：北京交通大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2008
【分类号】：R749.16
【图文】：

adamlo基因的PCR扩一增结果(adamlo图l.10taee基[A1的PCR扩增结wasamplifiedbyPCR)M:DL2000，l:adam1oamPlifiedbyPCR)M:DLZ000，1:二、重组体的鉴定和测序结果

1重组体pMD18一Tzapp的NeoFsalx双酶切鉴定结果(pMD18一T/appwasidentifiednenz卿eNeo1andsall)l，3，4，7，9，一。，l一可以酶切出两条带，为正确重组体;2，s，重组体2.设计引物App84O/APPll73，pCR鉴定Appisoforms结果(DesignedpriAPPll73andidentifiedbypCR)4号是appvl;3，7，9，11号是appvZ:10

2.设计引物App84O/APPll73，pCR鉴定Appisoforms结果(DesignedPPll73andidentifiedbypCR)4号是appvl;3，7，9，11号是appvZ:1异构体测序结果克隆过程中，抽取3个菌液样品各取100ul送北京奥科测序，采用T正反向测序结果如下:测序结果:atgetgeeegqtttgqeaetgCteetgetggCCgeetggacqgCtCgCtggaggtaCcCaCtga匕qgtaatgctgqCCtqetggCtgaaCCeeaga七七geeCtgtggCagaCtgaaea七‘JcaCatqaatgtCCagaatgggaagtqggattCagataggqaeCaaaaeetgeattqataeeaagqaaggeateCtgeagtattgeeaagaaeeetgaaCtqeagateae‘二aatgtggtagaageeaaeCaaCCagtgaCCatCCaggtgCaaqCqqggCCgCaaJCaqtgCaagaCCCatCCCCaCtttgtgattCCCtae

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本文编号：2802796