血管性痴呆大鼠海马区GAP-43及P38的表达及丁苯酞注射液对其影响

发布时间：2020-08-24 23:49

【摘要】：背景与目的血管性痴呆(Vascular dementia, VD)在老年痴呆中占第二位,但有研究表明,在亚洲高龄人群中VD的发病率甚至高于阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)居第一位。随着社会老龄化和人口平均寿命的增加,脑血管疾病发病率日趋增多,VD的发病率也随之有逐年上升的趋势。由于本病具有患病率和致残率高、治疗疗效差、病程长等特点,给社会和病人的家庭带来了沉重的经济和精神负担。因此,对VD及其治疗方法的研究成为了21世纪的重要课题,越来越引起全世界各国学者及医师的普遍关注。目前VD的治疗药物有胆碱酯酶抑制剂,增加神经营养制剂,脑细胞代谢活化剂、神经生长因子及营养因子、抗氧化剂等,但疗效均不明确。丁苯酞(dl-n-butylphthalide, dl-NBP)最早用于急性缺血性卒中的治疗,并取得了满意的疗效,近年来有部分医师把丁苯酞用于VD的治疗,但丁苯酞对VD是否有效及其作用机制如何,目前研究甚少。 VD的发病基础是缺血,机制之一是神经元的缺失,突触素的减少,因此如果能使损伤后的神经得以修复及重塑,就有可能改善VD的相关症状甚至治愈该疾病。神经修复及突触重塑已经成为人们高度关注的医学热门话题,并有大量的实验研究已经证实了神经修复及突触重塑的存在,而生长相关蛋白-43(GAP-43)和突触素P38是神经损伤重塑中的两个重要因子。本研究即通过建立VD大鼠模型,观察其学习记忆能力及GAP-43和P38在蛋白及基因水平上的表达变化和丁苯酞注射液对其影响，旨在探讨丁苯酞注射液治疗VD的疗效及作用机制。材料与方法 1.实验动物及分组健康雄性Wistar大鼠80只(郑州大学实验动物中心提供),体重350-450g,鼠龄为14-15周。随机分为假手术组(n=25),VD组(n=28),丁苯酞组(n=27),实验中VD组、丁苯酞组各死亡3只。 2.模型制备及药物干预采用双侧颈总动脉永久性结扎制备VD模型,丁苯酞组给予丁苯酞注射液6mg/kg (临用前制成乳剂)腹腔注射,每日一次,共6周,假手术组和VD组给予相同剂量的生理盐水腹腔注射,每日一次,共6周。 3.学习记忆能力测定腹腔注射结束后用MG-Y-型迷宫对其学习和记忆能力进行测定,大鼠受到电击后从起步区直接逃到安全区为正确反应,连续10次测试中有9次正确反应为达到学会标准。学习能力：达到学会标准前所需的电击次数。记忆能力：学习测试后休息24小时,同法检测,记录大鼠电击10次中的正确反应次数。 4.标本制备学习记忆能力测试完毕,将大鼠麻醉,假手术组、VD、丁苯酞组各取出3只,经心脏灌注内固定取脑,取出海马组织用甲醛固定,行HE染色观察形态学变化；其余大鼠麻醉后迅速断头取脑,分离出海马组织(冰上操作)立即置液氮中保存,分为两组检测系统：1nRNA检测、蛋白检测。各个系统每组标本基本相同(详见实验结果表)。 5.观察指标GAP-43和P38蛋白定量测定应用Western blotting技术检测,mRNA应用RT-PCR技术检测；组织形态学改变应用HE染色。 6.统计学方法所有实验数据以均数土标准误(x±s)表示,采用单因素方差分析对多组数据进行比较,用S-N-K法进行组间两两比较,所有数据采用spss17.0软件进行统计分析,α=0.05。结果 1Y迷宫实验VD大鼠组学习记忆能力最差(学习成绩71.60士4.10,记忆成绩4.24±1.20),丁苯酞组居中(学习成绩53.04±3.57,记忆成绩6.20±0.93),而假手术组学习记忆能力最强(学习成绩39.88±3.97,记忆成绩7.36±1.25)三组间的成绩有显著性差异,P0.05. 2海马区神经元形态学比较HE染色后在光镜下观察到：假手术组海马区神经元排列紧密,数量多,细胞核大清晰,染色均匀,核仁明显；VD组神经元排列不规整,细胞少,胞核深染,固缩,胞浆增多,核仁消失；丁苯酞组正常细胞较VD组多,但较假手术组减少,排列较密,核仁呈椭圆形或圆形,染色质丰富,固缩变性的神经元少见。 3mRNA测定结果VD组,丁苯酞组海马区GAP-43mRNA的表达较假手术组上调(P均0.05),且丁苯酞组较VD组上调明显(P0.05)；在P38mRNA的表达上,丁苯酞组较假手术组,VD组均上调(均P0.05),而VD组和假手术组无明显差别(P0.05)。假手术组、VD组、丁苯酞组GAP-43mRNA表达依次为：0.49±0.05,1.11士0.18,1.31±0.06；P38mRNA依次为：0.58±0.06,0.60±0.06,1.28±0.04。 4蛋白测定结果在GAP-43蛋白表达上,丁苯肽组较假手术组和VD组均上调(P均0.05),而假手术组和VD组无明显差别(P0.05)；在P38蛋白表达上,VD组、丁苯酞组较假手术组均下降(P均0.05),但VD组下降更明显(P0.05)。假手术组、VD组、丁苯酞组GAP-43蛋白表达依次为：1.17±0.05,1.19±0.05,1.61±0.04；P38蛋白表达依次为：1.71±0.04,1.32±0.06,1.57±0.05。结论 1VD大鼠海马组织内P38蛋白表达下调与大鼠的学习记忆能力损害密切相关,是VD导致认知功能障碍的分子机制之一； 2GAP-43mRNA、GAP-43蛋白及P38mRNA在缺血后的表达变化不是VD大鼠认知功能障碍的分子机制； 3GAP-43和P38两者在mRNA和蛋白的变化是丁苯酞注射液改善VD认知障碍的分子机制； 4丁苯酞注射液亦可能参与上调GAP-43的蛋白表达而上调P38的蛋白表达,从而促进突触的重塑和新突触的形成,最终改善VD大鼠的学习记忆能力。
【学位授予单位】：郑州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R749.13

【参考文献】