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POMGnT1基因参与了阿尔茨海默病的病理生理过程

发布时间:2020-09-03 20:00
   目的探讨β1,2-N-乙酰氨基葡萄糖-氧位-甘露糖基转移酶1 POMGnT1(Protein O-linked mannose β1,2-N acetylglucosaminyltransferase 1,POMGnT1)基因是否参与了阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)的病理生理过程。方法通过 Real-time PCR 和 Western blot 的方法,检测 POMGnT1 基因在AD模型细胞系(N2a/APP695swe)和正常对照细胞系(N2a/wt)这两个细胞系转录和翻译水平上的差异。利用免疫荧光染色比较POMGnT1在AD模型小鼠(APP/PSEN1)和正常野生型对照小鼠脑组织中的表达差异。通过免疫组织化学的方法,检测POMGnT1基因敲除小鼠2月龄和1岁龄脑组织中Aβ沉积。结果POMGnT1 基因在 N2a/APP695swe 中 mRNA(0.80 士 0.02)和蛋白质(0.50士0.019)的含量均显著低于N2a/wt(mRNA:1;蛋白质:1.31±0.039;均P0.01)。免疫荧光染色结果显示,POMGnT1在APP/PSEN1小鼠中阳性表达率明显低于正常野生型对照小鼠。免疫组织化学结果显示,2月龄POMGnT1-/-小鼠(0.358±0.014)和1岁龄POMGnT1-/-小鼠(0.266±0.0041)的脑中Aβ沉积均显著较同月龄正常野生型小鼠多(2月龄:0.048±0.001,P0.01;1岁龄:0.229±0.0025,P=0.0015)。结论POMGnT1基因参与了 AD的病理生理过程,并且起到了正向保护作用。
【学位单位】:重庆医科大学
【学位级别】:硕士
【学位年份】:2019
【中图分类】:R749.16
【部分图文】:

细胞系,基因


(9)用 PBS 洗 3 次后,DAB 显色,置于显微镜下观察;(10)苏木精复染 30s,流水冲洗;(11)用中性树胶封片,北航 CM-2000b 图像采集分析显1.2.7 统计分析所有的实验至少用三个独立样本,重复三次。所有数据以(x±s)表示,两独立样本均数比较采用 t 检验,检验水准 α23.0 软件分析。利用 Graphpad Prism 7.0 作图。2 结果2.1 POMGnT1 基因在转录水平的表达差异对 N2a/wt 和 N2a/APP695swe 细胞系进行 Real-time PCR 实细胞系均稳定表达这个基因,但是实验组 N2a/APP695swe 细胞量显著低于对照组 N2a/wt 细胞系(0.80 ± 0.02, P<0.01)。

细胞系,模型小鼠


图 2.2 Western blot 检测 APP 和 POMGnT1 在 N2a/wt 和 N2a/APP695swe 细胞系的表达结果。A:APP 在两个细胞系的表达,N2a/APP695swe 明显高于 N2a/wt(N2a/wt:x=0.13,s=0.0033;N2a/APP695swe:x=0.67,s=0.0167;n=3 ****P<0.01)B:POMGnT1 在两个细胞系的表达,N2a/AP695swe 明显低于 N2a/wt(N2a/wt:x=1.31,s=0.039;N2a/APP695swe:x=0.50,s=0.019; n=3.****P<0.01)Fig.2.2 Results of Western blot of APP and POMGnTA: Expressions of APP on two cell lines. N2a/wt, mean=0.13, SEM=0.0033; N2a/APP695swe,mean=0.67, SEM=0.0167; n=3.****p<0.01B: Expressions of POMGnT1 on two cell lines. N2a/wt, mean=1.31, SEM=0.039;N2a/APP695swe, mean=0.50, SEM=0.019; n=3.****p<0.012.3 POMGnT1 基因在动物模型中的表达情况免疫荧光结果表示,AD 模型小鼠(APP/PSEN1)较正常野生型对照小鼠,

动物模型,基因,基因敲除小鼠,模型小鼠


图 2.3 免疫荧光检测 POMGnT1 基因在动物模型中的表达。A 和 B 是 AD 模型小鼠(APP/PSEN1),C 和 D 是与之对应的相同结构的野生型小鼠。核是 DAPI 所染的蓝色,阳性表达为荧光所染的红色,位于胞质中。实验组 A 和 B 相较于对照组 C 和 D,阳性表达率明显更低。实验结果由病理老师共同分析所得。Fig.2.3 Results of immunofluorescence in model mice and wild-type mice. A and B are sectionsof AD-like model mice, while C and D are sections wild-type mice. Nuclei stained with DAPIare displayed in blue. POMGnT1 is localized in the cytoplasm, where its immunostaining withred. The differences between two groups is visible significant. Red-stained positive results wereless in the A/B sections than in the C/D sections.2.4 POMGnT1 基因敲除小鼠大脑中更多 Aβ 沉积AD 的两个病理特征,其中 NFT 现象已在 POMGnT1 基因缺陷患者脑中得以证实[3]。为了证明 POMGnT1 基因与 Aβ 沉积的关系,我们利用免疫组织化学的方法,分别检测 2 月龄和 1 岁龄 POMGnT1 基因敲除小鼠的 Aβ 沉积情况。Aβ 沉

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本文编号:2811894


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