尼古丁暴露对C57小鼠海马Epac信号通路的影响

发布时间：2020-09-25 10:18

　　 目的:烟草滥用一直是中国以及世界范围的主要公共问题,多年来有关各方为解决这一难题投入了大量的人员和资金。鉴于成瘾机制的复杂性,目前还没有一种特效药可以彻底根治烟草成瘾,导致大多数成瘾者要与烟草相伴终生,为家庭以及社会增添了沉重的经济负担,同时对自身以及周围人的健康产生巨大影响。尽管女性占所有吸烟者的一半,而且许多研究表明成年男性和女性对吸烟的反应不同,当前关于男性和女性对吸烟影响的神经生物学研究还是十分有限的。现有研究发现 cAMP 直接激活的交换蛋白(exchange protein directly activated by cAMP,Epac)信号通路参与药物成瘾行为。为了进一步探究尼古丁对海马神经元Epac表达影响以及成年尼古丁成瘾小鼠海马Epac信号通路和行为学变化,以期为攻克尼古丁依赖的顽疾提供一条新途径。方法:(1)体外培养原代海马神经元,观察海马神经元形态学的变化,通过免疫荧光将GFAP与MAP2共染进一步鉴定神经元的纯度。(2)在离体培养成熟的原代海马神经元中加入尼古丁,Western blot检测Epac蛋白表达变化。加入MLA(methyllycacotine,α7nAChR抑制剂)观察其对Epac蛋白表达的影响。(3)建立尼古丁诱导的成年C57BL/6小鼠(包含雄性和雌性)条件位置位置偏爱(conditioned preference place,CPP)模型。(4)旷场实验记录成年雌性和雄性尼古丁偏爱小鼠自主活动的变化。(5)Western blot分析尼古丁诱导的CPP雄性和雌性小鼠海马Epac信号、p-CREB、α7nAChR、PKA的蛋白表达。结果:(1)尼古丁作用体外海马神经后Epac1蛋白表达量上调,作用8h后升高明显,随后即趋于正常,而Epac2在4 h、8 h、12 h、24 h的表达量上升。尼古丁能够增加海马神经元Epac蛋白表达,加入MLA会抑制Epac2蛋白表达。(2)尼古丁在0.2mg/kg(雄性,SC)和0.4mg/kg(雌性,SC)能够诱导成年小鼠产生CPP。(3)旷场实验中,与自身对照组相比,雄性小鼠在中心区停留时间明显上升,减少了雄性小鼠焦虑样行为,而雌性小鼠的自发活动显著增加,提升了雌性小鼠的活跃度。(4)CPP实验后,Western blot结果显示在雄性和雌性小鼠的海马中Epac2表达量显著性上升,但Epac1的变化并不明显。在雌性小鼠中,Rap1蛋白显著升高并且磷酸化CREB明显降低。结论:尼古丁作用于体外海马神经元能够刺激Epac表达上调,MLA能够抑制Epac的表达。尼古丁诱导CPP小鼠中海马Epac信号通路发生改变。总之,尼古丁暴露可以增加海马内Epac信号的表达,为治疗尼古丁滥用和依赖提供了新的药理学上的靶点。图[13]表[0]参[48]
【学位单位】：安徽理工大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R749.6
【部分图文】：

图１：海马神经元形态学变化（１００Ｘ）逡逑Ｆｉｇ邋１．邋Ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ邋ｃｈａｎｇｅｓ邋ｏｆ邋ｈｉｐｐｏｃａｍｐａｌ邋ｎｅｕｒｏｎｓ邋（１０0ｘ邋）逡逑

图２：海马神经元细胞化学染色

图４：尼古丁对海马神经元ＰＫＡ表达水平的影响

【参考文献】

相关博士学位论文 前1条

1 马云龙;吸烟行为及尼古丁成瘾的遗传学和表观遗传学机制探索[D];浙江大学;2017年

本文编号：2826593