NMDAR介导妊娠期慢性应激致子代雄鼠抑郁

发布时间：2020-10-18 07:03

　　 目的探讨N-甲基-D-天门冬氨酸受体(N-methyl-D-aspartate receptor,NMDAR)在妊娠期慢性应激致子代抑郁中的介导作用。方法第一部分:选取健康SPF级KM小鼠,雌雄比2:1配对合笼,见栓小鼠单笼饲养,记为妊娠第一天(G1),将G7孕鼠分为妊娠期应激组与空白对照组。应激组孕鼠施加慢性应激,对照组小鼠正常饲养。子鼠出生后分成:孕期应激+生理盐水组(CPS+SAL),孕期正常+生理盐水组(CON+SAL),孕期正常+子代正常组(CON),孕期应激+0.05mg·kg~(-1) MK-801组(CPS+ANT-0.05),孕期应激+0.1mg·kg~(-1) MK-801组(CPS+ANT-0.1),孕期应激+0.3mg·kg~(-1) MK-801组(CPS+ANT-0.3)。通过糖水偏好实验、悬尾实验和强迫游泳实验观察子代抑郁程度;HE染色观察海马神经元病理变化;ELISA法检测海马脑组织NMDAR水平;WB法检测海马组织mTOR和p-mTOR(Ser2448)蛋白含量,RT-PCR法检测小鼠海马mTOR mRNA水平。第二部分:取出生7天的SPF级的Sprague-Dawley(SD)大鼠,冰上取脑作冠状切片,体外培养海马脑片,通过加入CRH和NMDAR拮抗剂将实验分为以下几组:正常对照组(control),1.0μM CRH+溶剂对照组(CRH),1.0μM CRH+10μM MK-801组(Low),1.0μM CRH+20μM MK-801组(Middle),1.0μM CRH+50μM MK-801组(High)。通过WB检测脑片组织mTOR(Ser2448)蛋白含量。结果1.糖水偏好实验显示CPS+SAL组小鼠的糖水偏好率相对于CON+SAL组明显下降(P0.05),与CPS+SAL组相比,CPS+ANT-0.05,CPS+ANT-0.1和CPS+ANT-0.3组的糖水偏好率均升高(P0.05)。2.悬尾实验结果显示,CON组与CON+SAL组差异无显著性,与CON+SAL组相比,CPS+SAL组小鼠的不动时间明显延长(P0.05),与CPS+SAL组相比,CPS+ANT-0.05和CPS+ANT-0.1组悬尾不动时间明显减少(P0.05)。3.强迫游泳实验结果显示,与CON+SAL组相比,CPS+SAL组不动时间延长(P0.05),与CPS+SAL组相比,CPS+ANT-0.05,CPS+ANT-0.1和CPS+ANT-0.3组的不动时间明显减少(P0.05),其中CPS+ANT-0.1组的不动时间最接近正常水平。4.HE结果显示,CON和CON+SAL组小鼠海马CA3区神经元细胞染色清晰,排列整齐,数量较多,CPS+SAL组海马CA3区神经元细胞排列松散,核仁着色深,核固缩现象明显,神经元数量减少。CPS+ANT-0.05组、CPS+ANT-0.1组和CPS+ANT-0.3组小鼠海马CA3区细胞排列规矩整齐,细胞形态较CPS+SAL组有明显改善,核仁明显。5.ELISA结果显示,与CON+SAL组相比,CPS+SAL组海马NMDAR水平明显升高(P0.05),与CPS+SAL组相比,CPS+ANT-0.1组和CPS+ANT-0.3组NMDAR水平降低(P0.05),CPS+ANT-0.05组与CPS+SAL组相比差异无统计学意义(P0.05)。6.WB结果显示与CON+SAL组相比,CPS+SAL组小鼠mTOR表达量显著下降(P0.05),与CPS+SAL组相比,CPS+ANT-0.05组,CPS+ANT-0.1组和CPS+ANT-0.3组海马mTOR表达量均升高;与CON+SAL组比较,CPS+SAL组海马组织p-mTOR表达显著下降(P0.05),CPS+ANT-0.05和CPS+ANT-0.3组海马p-mTOR表达也降低且有统计学意义(P0.05),与CPS+SAL组相比,CPS+ANT-0.05,CPS+ANT-0.1和CPS+ANT-0.3组海马p-mTOR表达均升高(P0.05)。7.RT-PCR结果显示CPS+SAL组海马mTOR mRNA水平相对CON+SAL组略高,但是各组之间mTOR mRNA表达水平无统计学意义(P0.05)。8.海马脑片mTOR蛋白检测的结果显示,与control组相比,CRH组的mTOR表达显著下降(P0.05),与CRH组相比,Low,Middle和High组脑片mTOR表达上升且差异有统计学意义(P0.05),而Low,Middle和High组脑片mTOR含量与control组相比差异无统计学意义。结论NMDAR介导了妊娠期慢性应激致子代抑郁,此作用可能与其抑制mTOR激活,导致子代海马CA3区神经元发生损伤有关。
【学位单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R749.4
【部分图文】：

20图 1 妊娠期慢性应激对子鼠糖水偏好率的影响以 20 天子代雄鼠为研究对象，实验分为孕期应激+生理盐水组（CPS+SAL），盐水组（CON+SAL），孕期正常+子代正常组（CON），孕期应激+0.05mg k（CPS+ANT-0.05），孕期应激+0.1mg kg-1 MK-801 组（CPS+ANT-0.1），孕期应MK-801 组（CPS+ANT-0.3）。CPS+SAL 组： ±s=75.06±1.58，n=10；CON+SAL 组n=10；CON 组：89.87±3.45，n=10；CPS+ANT-0.05 组：87.67±6.13，n=10；CP82.48±9.97，n=10；CPS+ANT-0.3 组：85.84±7.53，n=10，与 CON+SAL 组比较CPS+SAL 组比较:#P<0.05Fig.1. Effects of chronic stress in pregnancy on the sucrose preference rate of soffspring20-day offspring male mice as the research object and randomly devided into the c

prenatal control+ offspring control group (CON), ch0.05mg kg-1 MK-801 injected group (CPS+ANT-0.05), chron0.1mg kg-1 MK-801 injected group (CPS+ANT-0.1), chronic prenaMK-801 injected group (CPS+ANT-0.3), CPS+SAL group： ±s=7group： ±s=88.47±4.67，n=10；CON group：89.87±3.45，n=10；CPSn=10；CPS+ANT-0.1 group：82.48±9.97，n=10；CPS+ANT-0.3 grouwith CON+SAL group: * P<0.05; compared with CPS+S悬尾实验结果显示，CON 组与 CON+SAL 组无明显比，CPS+SAL 组小鼠的不动时间明显延长（P＜0.05）CPS+ANT-0.05 和 CPS+ANT-0.1 组悬尾不动时间明显减少组不动时间无明显差异（P＞0.05），CPS+ANT-0.05，CPS组与 CON+SAL 组相比差异无统计学意义，提示拮抗剂不良影响。

图 3 妊娠期慢性应激对子鼠强迫游泳实验中以 20 天子代雄鼠为研究对象，实验分为孕期应激+生理盐水组盐水组（CON+SAL），孕期正常+子代正常组（CON），孕期应（CPS+ANT-0.05），孕期应激+0.1mg kg-1 MK-801 组（CPS+ANMK-801 组（CPS+ANT-0.3）。CPS+SAL 组： ±s=66.15±7.74，n=10n=10；CON 组：25.00±6.32，n=10；CPS+ANT-0.05 组：40.51±529.71±3.06，n=10；CPS+ANT-0.3 组：37.80±5.57，n=10，与 CCPS+SAL 组比较:#P<0.05Fig.3. Effects of chronic prenatal stress on immobility time 20-day offspring male mice as the research object and randomly dstress+ offspring saline-injected group (CPS+SAL), prenatal contro(CON+SAL), prenatal control+ offspring control group (CON), ch
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本文编号：2845975