海马SIK2在抑郁症病理生理过程中的作用研究

发布时间：2020-10-18 06:07

　　 目的研究海马SIK2在抑郁症病理过程中的作用机理,以及其是否介导氟西汀和文拉法辛的抗抑郁作用;探讨以海马SIK2为靶点对抑郁症进行治疗改善的新思路。方法首先,以C57BL/6J小鼠制造慢性社会挫败应激(CSDS)抑郁模型,通过Western blotting、qRT-PCR、免疫共沉淀等分子生物学方法检测抑郁症发生后海马SIK2-CRTC1通路系统的改变。然后,采用AAV基因干预技术并配合CSDS模型、行为学测试及Western blotting等手段,研究过表达海马SIK2能否模拟抑郁症,诱发抑郁样行为及相关病理症状,以及沉默海马SIK2能否逆转CSDS模型引起的一系列症状,产生抗抑郁效应。最后,研究临床抗抑郁药物氟西汀与文拉法辛能否逆转CSDS模型导致的海马SIK2-CRTC1通路改变。结果实验结果表明,CSDS模型一方面引起海马SIK2的蛋白与mRNA水平剧烈上升,CRTC1的蛋白与mRNA水平显著下降,而对SIK1、SIK3、CRTC2及CRTC3无影响;另一方面导致海马CRTC1的胞核转运受损,核内CRTC1-CREB蛋白结合水平明显减少。过表达海马SIK2能够模拟抑郁症,诱发小鼠的绝望情绪、快感缺失、社交恐惧等抑郁样行为以及海马脑源性神经营养因子(BDNF)通路水平降低与神经发生受损等病理症状;相反,沉默海马SIK2显著逆转了CSDS模型引发的诸多抑郁样症状,产生抗抑郁效应,且此效应乃是通过调控其下游CRTC1与BDNF系统功能所致。另外,氟西汀与文拉法辛皆显著逆转了CSDS模型导致的海马SIK2-CRTC1通路改变。结论1.海马SIK2介导抑郁症的发生过程。2.以海马SIK2为干预靶点可产生抗抑郁作用。3.海马SIK2也参与临床药物氟西汀与文拉法辛的抗抑郁机理。
【学位单位】：南通大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R749.4
【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 绪论
第二章 材料与方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 实验动物
        2.1.2 主要仪器
        2.1.3 实验用药
        2.1.4 试剂耗材
        2.1.5 试剂配制
    2.2 实验流程与方法
        2.2.1 小鼠饲养
        2.2.2 强迫游泳
        2.2.3 悬尾测试
        2.2.4 慢性社会挫败应激模型
        2.2.5 社会接触
        2.2.6 糖水消耗
        2.2.7 旷场实验
        2.2.8 Western blot
        2.2.9 灌流固定；冰冻切片
        2.2.10 组织免疫荧光
        2.2.11 脑立体定位注射
        2.2.12 组织免疫共沉淀
        2.2.13 组织核浆分离
        2.2.14 实时定量PCR
    2.3 统计学分析
第三章 结果
    3.1 第一部分抑郁症伴随海马SIK2表达水平的显著升高
        3.1.1 CSDS抑郁模型的制造及行为学验证
        3.1.2 分子生物学研究表明海马SIK2及其下游CRTC1参与抑郁症的病理过程
    3.2 第二部分基因过表达海马SIK2诱导抑郁症的发生
        3.2.1 腺相关病毒（AAV）过表达海马SIK2水平的效果验证
        3.2.2 AAV过表达海马SIK2水平诱发诸多抑郁样行为
        3.2.3 AAV过表达SIK2对海马CRTC1-CREB-BDNF蛋白通路水平影响
        3.2.4 海马SIK2过表达抑制小鼠的海马神经发生水平
    3.3 第三部分基因沉默海马SIK2产生抗抑郁样效应
        3.3.1 AAV沉默海马SIK2水平的效果验证及相关行为学效应
        3.3.2 AAV沉默海马SIK2逆转CSDS模型导致的抑郁样行为
        3.3.3 AAV沉默海马SIK2逆转CSDS模型引发的CRTC1-CREB-BDNF蛋白通路水平变化
        3.3.4 AAV沉默海马SIK2逆转CSDS模型对海马神经发生的影响
        3.3.5 海马SIK2沉默诱导的抗抑郁效应需要下游CRTC1
        3.3.6 海马SIK2沉默诱导的抗抑郁效应需要下游CREB
        3.3.7 阻断BDNF系统能够阻断海马SIK2沉默产生的抗抑郁样效应
    3.4 第四部分海马SIK2也介导参与氟西汀和文拉法辛的抗抑郁作用
        3.4.1 氟西汀和文拉法辛在CSDS模型中的抗抑郁效应验证
        3.4.2 氟西汀和文拉法辛均逆转CSDS引起的SIK2-CRTC1-CREB通路改变
第四章 讨论
第五章 结论
参考文献
英文缩写词表
综述
    综述参考文献
在攻读硕士学位期间已经发表的论文与参加的项目
    A：发表的论文
    B：所参加的项目
致谢

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本文编号：2845913