长期使用氯胺酮导致食蟹猴大脑血管氧化应激及凋亡的机制研究

发布时间：2020-10-29 22:59

　　 研究背景 氯胺酮是N-甲基-D-天门冬氨酸(N-methyl-D-aspartate,NMDA)受体的非竞争性拮抗剂,长期滥用会导致学习、记忆等认知功能的损害,但其机制尚不完全清楚。大量研究认为,长期应用麻醉剂量的氯胺酮可致神经细胞调亡,从而引发与记忆密切相关的脑区如海马功能紊乱,继而出现记忆障碍。最近的研究结果表明,氯胺酮作为新兴毒品被长期滥用,除导致记忆功能损伤外,还引起人情绪和人格出现异常,提示氯胺酮的中枢损伤效应存在多元性。学习记忆障碍是脑血管性疾病的主要症状,由脑血管损伤引发的缺血缺氧是导致学习记忆障碍的主要原因之一。但氯胺酮长期使用是否对脑血管产生影响尚没有系统研究。本实验通过观察长期静脉应用氯胺酮的食蟹猴行为学、大脑动脉形态学及蛋白质组学的改变来研究氯胺酮引起食蟹猴大脑血管氧化应激及凋亡的可能机制。 研究目的 观察氯胺酮连续给药对食蟹猴行为学、大脑动脉(动脉环交通支)形态、氧化应激及凋亡的影响。 研究方法 随机将12只健康雄性食蟹猴分为氯胺酮组和生理盐水组,氯胺酮组8只,每天股静脉注射盐酸氯胺酮注射液,剂量为1mg/kg。生理盐水组4只,每天股静脉注射生理盐水,剂量为1mL/kgo分别在造模的第1、3、7、14、56、112、183、184、185天,于自然状态下用摄像机记录注射氯胺酮或生理盐水前后15分钟的行为变化,连续观察6个月。持续给药6个月后牺牲动物,冰上剥离食蟹猴脑血管(动脉环交通支),部分置-80℃保存,剩余部分制备石蜡切片。HE染色观察大脑动脉的形态学变化；原位末端脱氧核糖核苷酸转移酶标记技术(Tunnel法)检测脑动脉细胞凋亡水平：用比色法测定H2O2水平用以衡量血清和血管组织内的活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平；采用免疫组织化学染色和Western blot检测血管中NADPH氧化酶的表达。 研究结果 1.与对照组比较,氯胺酮组行为学未出现明显变化。 2.连续给药6个月后,氯胺酮组动脉环交通支中出现明显的血栓,血栓成分主要是血小板、红细胞、白细胞和纤维蛋白,呈混合血栓的特征,另外还可发现血管内膜增厚；而对照组其血管壁光滑,无异物出现。此外,氯胺酮组动脉环交通支外膜有明显的炎性细胞浸润；而对照组血管壁无白细胞浸润。 3.连续给药6个月后,氯胺酮组和对照组动脉环交通支细胞均未出现明显的凋亡现象。 4.连续给药6个月后,氯胺酮组血清和血管组织中活性氧水平明显高于对照组,说明氯胺酮长期滥用后可引起组织中抗氧化能力降低、细胞功能受损。 5.连续给药6个月后,氯胺酮组免疫组织化学和Western blot检测动脉环交通支组织NADPH亚基p47phox蛋白的表达明显高于对照组,差异有统计学意义。 研究结论 1.长期连续使用氯胺酮不会引起食蟹猴明显的行为学改变。 2.长期连续使用氯胺酮不会引起食蟹猴脑血管细胞凋亡。 3.长期连续使用氯胺酮可激活脑血管内皮细胞NADPH氧化酶,后者诱发血管内皮细胞氧化应激,导致血管炎症和血栓形成。
【学位单位】：山东大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2011
【中图分类】：R749.6
【部分图文】：

山东人学石贞十学位论文附图附图1行为学变化曲线图A ClimbBJumPCOntrolketamine.-SEO卜05﹄” 1sn甘2月.月..-SOE卜 01371456112183184185DaysCMOV6 1371456112183184185days DWalk50川卜COntro80ketaminG州.~叫.卜Cont旧l4060kGtamineD4SOE一l的30200﹃11︸02月.口住!卜 3714 112183184185 3714112183184185图1氯胺酮组和对照组食蟹猴相比在攀爬、跳跃、移动和行走等自发运动行为上无明显差异: Fig1Long一 termadministrationofketaminedidnotehangethee” omolgusmonkeys’ behaviorofthesPontaneousmovement， includingmove，walk， elimbandjumP.26

对照组氯胺酮组图2氯胺酮组和对照组食蟹猴大脑动脉环交通支形态学改变(HE染色法，标尺为100林M)。实验组中二只食蟹猴的血管中均发现明显的血栓形成，而对照组血管壁光滑，无异物出现(A)。氯胺酮组食蟹猴大脑动脉环交通支中出现明显的血栓，血栓成分卞要是血小板、红细胞、白细胞和纤维蛋白，呈混合血栓的特征(B)，另外血管内膜增厚(箭头所指)。氯胺酮组食蟹猴大脑动脉环交通支外膜有明显的炎性细胞浸润(实验组中有两只食蟹猴的血管中发现明显炎性细胞浸润)(D)，而对照组血管壁无白细胞浸润(C)。Fig.2Long一termadministrationofketamineindueedthrombusandinflammato卿celinfiltrationinthecerebrovascularofeynomolgusmonkeybyHEstaining(Ba作100卜M)A.B，T即iealPhotogr叩hsofHEshownketamineinducedthrombusineerebrovascularC，D，TyPiealPhotograPhsofHEshownketamineindueedinflammationcerebrovascul肛

3氯胺酮组连续给药6个月诱发食蟹猴血清和血管组织中活性氧水平明显增**尸<0.001)9.3Long一termadministrationofketamineinereasedROSlevelinthePlasmarebrovascularofcynomolgusmonkey，***P<0.001VSeontrol
【参考文献】

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1 林林;黄陈平;方周溪;虞丽珍;;多次氯胺酮麻醉对大鼠学习记忆的影响[J];安徽医药;2006年07期

2 胡春旭,高崇荣;亚麻醉剂量氯胺酮用于治疗急性严重哮喘9例报道[J];临床麻醉学杂志;2000年01期

3 蒋娟,汪萌芽,胡凤玉,潘群皖;氯胺酮对离体海马神经元的浓度相关性作用[J];皖南医学院学报;2002年04期

4 黄陈平;林林;宋明芬;方周溪;;氯胺酮对大鼠学习记忆功能及海马神经元的影响[J];毒理学杂志;2007年03期

5 王贤裕,田玉科,杨辉,安珂;腹腔重复注射小剂量氯胺酮术后镇痛对趾部切口术大鼠认知功能的影响[J];中华麻醉学杂志;2005年03期

6 刘毓和;吴新民;杜敏逸;;咪唑安定、异丙酚和氯胺酮对老年大鼠认知功能的影响[J];中华麻醉学杂志;2006年04期

本文编号：2861588