Aβ（1-40）和192-IgG-saporin致阿尔茨海默病动物模型的构建

发布时间：2020-11-03 23:13

　　 阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease, AD),是老年人中最常见的神经退行性疾病,多发于65岁及以上的老年人。其临床特点为隐袭起病,逐渐出现记忆力减退、认知功能障碍、行为异常和社会障碍。随着我国人口老龄化的日益严重,老年性痴呆越来越成为一个严重的社会问题。据统计,目前我国已有1.29亿人口超过60岁,老年人占总人口的比例已达到10.15 %,从而使我国提前成为老年型人口的国家。值得注意的是,老年性痴呆患病率约占60岁人口的10%左右,其中阿尔茨海默病(AD)占5%左右,在我国估计已有约645万病人。而且年龄每增加5岁,AD的患病率将增加两倍,在80-85岁的病人中有20%的老年人患有老年痴呆。是继心脏病、肿瘤和脑卒中之后的第四位死因,给患者家庭、社会造成了很大的负担及压力。因此,AD研究已成为当今神经科学的一个迫切课题。 AD的主要病理特征改变有以下三个方面(1)老年斑(Senile Plaque, SP)的形成,主要是细胞外Aβ蛋白的沉积所制。(2)胞内神经纤维缠结(Neurofibrilary tangles,NFT)的形成,多与Tau蛋白的异常磷酸化有关。(3)神经元的凋亡及丢失,以基底前脑胆碱能神经元的丢失最为严重,同时伴有γ-氨基丁酸(GABA)能、去甲肾上腺素能和5-羟色胺能(5-HT)能神经元丢失。 AD的动物模型作为AD病因、发病机制及治疗研究的基础,一直以来都缺乏理想的动物模型。目前常用的AD模型构建方法有以下几种:1:外力损伤模型,如海马穹窿伞切割模型2:Aβ淀粉样蛋白片段脑内注射模型3:兴奋性药物损伤基底前脑胆碱能神经元的模型4:复合动物模型5:转基因动物模型。各种动物模型都能在一定程度上模拟AD的行为学的损害及部分病理特征,但是仍然没有一种动物模型能够较全面的模拟AD的所有病理特征,严重阻碍了AD研究的进展。本实验主要研究神经免疫毒素192-IgG-saporin及Aβ(1-40)片段致阿尔茨海默病的实验动物模型的构建。 实验部分 1材料与方法 SD雄性大鼠32只,重250-300g,随机分成4组,每组8只,分别为:正常组、Aβ(1-40)组(Aβ组)、神经免疫毒素192-IgG-saporin组(192组)、神经免疫毒素192-IgG-saporin及Aβ1-40联合组(联合组)。Aβ组单侧海马内注射Aβ(1-40)片段10μl(1μg/μl),192-IgG-saporin组单侧侧脑室注射192-IgG-saporin 5μl(2.5μg/μl)。联合组为单侧脑室以及海马内分别注射192-IgG-saporin 5μl(2.5μg/μl)和Aβ1-40 10μ(l1μg/μl),坐标分别为,侧脑室:前囟后0.8 mm,左侧旁开1.5 mm,进针深5.5 mm。海马:前囟后3.4 mm,左侧旁开2.5 mm,进针深4.5 mm。2周后行Y迷宫以测试,测试结束后经灌注,固定,去脑,蔗糖脱水,冰冻切片。基底前脑切片行ChAT免疫组化染色,对内侧隔核(MS),斜角带垂直支(VDB)的ChAT阳性神经元进行计数,海马切片行胆碱能纤维(AChE)、星型胶质细胞(GFAP)免疫组化染色、尼氏染色、刚果红染色及硫磺素T荧光染色,对海马AChE阳性纤维、锥体细胞和GFAP阳性细胞计数。数据用SPSS统计软件包进行统计学处理。 2结果 Y迷宫测试大鼠学习记忆能力,结果显示各损伤组学习记忆能力与正常组比较均有下降,差异有统计学意义(P0.05)。各损伤组之间无明显变化,差异无统计学意义(P0.05)。刚果红以及硫磺素T染色结果表明,Aβ(1-40)组及联合组海马区内有聚集的Aβ沉积.且能造成海马区明显的锥体细胞丢失,差异有统计学意义(P0.05),192-IgG-saporin组海马区锥体细胞无明显变化(P0.05)。Aβ1-40组及联合组海马区星型胶质细胞增生(P0.05),192-IgG-saporin组未见明显增生(P0.05). 192-IgG-saporin组以及联合组胆碱能纤维数量明显减少(P0.01),Aβ1-40组胆碱能纤维数量未见明显变化(P0.05)。192-IgG-saporin组及联合组基底前脑ChAT阳性细胞数明显减少(P=0.01),Aβ组基底前脑ChAT阳性细胞数未见明显变化(P0.05). 3小结 Aβ以及神经免疫毒素联合作用动物模型,学习记忆能力明显下降.基底前脑胆碱能神经元数量显著减少。海马区椎体细胞数目减少,星形胶质细胞增生,胆碱能神经纤维数量明显减少。 总之:Aβ(1-40)和神经免疫毒素的联合作用比单独作用能更加全面的模拟AD病理特征,是比较理想的AD动物模型。
【学位单位】：广州医学院
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2010
【中图分类】：R749.16
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本文编号：2869245