Wistar大鼠青少年期尼古丁暴露对成年期乙醇自身给药和VTA区nAChR亚单位表达的影响

发布时间：2020-11-15 13:52

　　 青少年期是物质滥用的危险期,此期开始吸烟者占烟民的80%,而青少年期吸烟可以预测成年期的酒依赖。位于VTA的nAChR在乙醇的犒赏机制中起关键作用,可能是乙醇和尼古丁犒赏的共同作用点。本研究复制相应的动物模型,对青少年期Wistar大鼠给以尼古丁暴露,在成年期建立酒依赖自身给药模型,探讨青少年期尼古丁暴露和成年期酒滥用的关系及VTA区nAChR所起的作用。 目的: 观察大鼠青少年期尼古丁暴露对成年期乙醇自身给药的影响,并检测青少年期尼古丁暴露和成年期乙醇自身给药对VTA脑区nAChR受体部分热点亚单位mRNA表达的作用。 方法: Wistar大鼠出生后35天(PN35)开始为期十天的尼古丁(1.0mg/kg/day salt、)皮下注射,以生理盐水作为对照处理。部分大鼠出生后60天(PN60)以Samson糖水递减程序诱导建立乙醇双瓶自由选择自身给药模型,观测干预对Wistar大鼠乙醇消费量、酒偏好程度、总饮液量的影响。其后Real Time-PCR定量检测各组大鼠VTA标本α4、α5、α7和β2nAChR亚单位mRNA,观察尼古丁干预和乙醇自身给药对α4、α5、α7和β2亚单位mRNA表达的影响。 结果: 青少年期尼古丁干预对成年期乙醇自身给药的各项指标无明显影响。 VTA区nAChR亚单位mRNA的表达:未建立酒依赖模型两处理组间α4、α5、α7和β2亚单位mRNA表达无差异;建立酒依赖模型两处理组间α4、α5、α7和β2亚单位mRNA表达都有不同程度的显著性差异,其中尼古丁处理组α4、α5和β2表达上调,生理盐水处理组α7表达下调。因素分析显示:两因素对α4和α5亚单位表达都有调节作用;酒依赖模型因素对β2表达有调节作用;对α5、α7和β2亚单位表达两因素有交互作用。 结论: 1.青少年期尼古丁干预可以调节nAChR亚单位α4、α5、α7、β2的表达,对成年期酒依赖的形成可能没有促进作用。研究没有能够验证理论假设。 2.尼古丁和乙醇共同作用于VTA区包含有α4、α5、α7、β2亚单位的nAChR亚型。包含有α4、α5、α7、β2亚单位的多种nAChR亚型参与酒依赖形成的过程,但对酒依赖形成可能不起关键作用。 3.有必要结合遗传差异来考虑nAChR亚单位mRNA表达和酒依赖形成的关系。
【学位单位】：中南大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2009
【中图分类】：R749.6
【部分图文】：

nAChR结构示意图

首先利用反转录酶 PrimescriPtTxRTase将RNA反转录成cDNA，然后使用 RealTimePCR反应用试剂，以合成的cDNA为模板，进行 RealTimePCR反应，原理见图1一3。在使用 TaKaRaExTa尹HS对样本 cONA进行PCR扩增时，加入荧光染料 SYBRGreenl，使之与通过PCR反应生成的双链DNA结合发出荧光，原理如图

硕士学位论文第一章前言1一4所示。实验时实时监测反应体系中的SYBRGreenl荧光强度，通过检测反应液中SYBR⑧Greenl的荧光强度，达到监控PCR产物扩增量的目的。此外通过检测荧光不但可以检测反应体系中的DNA扩增量，同时还能测定扩增产物的DNA融解温度。
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本文编号：2884827