牛磺酸对谷氨酸诱导大鼠海马神经干细胞损伤的保护作用研究
发布时间：2021-01-05 09:11
抑郁症,具有心境孤独,情绪低沉,发病率高,病程持续时间长等临床特点,据估计到2030年抑郁症将会位于全球疾病负担首位。研究发现,海马体参与动物机体情感、认知、学习及记忆能力的形成,与抑郁症的发生发展密切相关。本课题组前期研究证明牛磺酸可缓解慢性轻度不可预见应激（CUM）导致的大鼠抑郁症状,降低海马体中谷氨酸的含量,但其确切机制有待于进一步研究。本试验分离培养海马神经干细胞,建立谷氨酸损伤模型,并在培养基中给予牛磺酸,探讨牛磺酸对谷氨酸诱导神经干细胞损伤的保护作用,从神经干细胞增殖分化的角度阐明牛磺酸预防抑郁症的作用机制。体外培养出生24 h内胎鼠的海马神经干细胞,经Nestin染色鉴定后,选取第二代的细胞进行试验。分组为:正常对照组（Control）;牛磺酸对照组（Tau）、谷氨酸损伤组（Glu）、牛磺酸预防组（Tau+Glu）。CCK-8检测细胞活力;免疫荧光染色检测BrdU、β-TubulinⅢ以及GFAP的表达情况;TBA法和WST-1法检测胞内MDA含量及SOD活力;AO/EB染色检测细胞凋亡;Western-blot检测BDNF/ERK/CREB通路上关键蛋白表达及其磷酸化情...
【文章来源】：沈阳农业大学辽宁省
【文章页数】：67 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
抑郁症发病假说（Mlyniec，2015）
第一章 文献综述（1995）的实验中得到证实，所以说谷氨酸能功能障碍与抑郁症的发生密切相关 HPA 轴假说下丘脑-肾上腺-垂体轴（HPA）是神经内分泌系统的重要组成部分，调节应激反应，机体适应环境变化。也参与自身机体的各种活动，包括消化、运动、记忆以及情感等活动（Slavich and Irwin，2014）。下丘脑释放的激素首先促进垂体释放激素的释经 HPA 轴的传递，最终促进肾上腺激素的释放，反过来，肾上腺激素的增多会抑丘脑和垂体释放激素，正负调节共同维持机体平衡。动物机体面对各种应激环境条是导致抑郁症发生的首要原因。而当 HPA 轴被过度刺激并且发生功能亢进时，会丘脑神经元过多释放激素，最终使得机体糖皮质激素、盐皮质激素分泌增多，导致症的发生，如图 1-2 所示（Anacker and Hen，2017）。
（3）取材：为减少脑部的血液，将胎鼠垂直放置 1 min 左右，然后用手术剪鼠头剪断，沿着头部正中线剪开，掀开大脑皮质并将大脑暴露出来，用眼科镊子皮质剥开，取出左右两侧的海马体，放到加入双抗的 D-Hank’s 液中，冲洗干净。（4）机械消化：用 D-Hank’s 液将海马组织冲洗 1-2 次，将杂质洗干净，然Hank’s 液吸出，加入 DMEM/F12 培养基，用 5 mL 的枪头进行机械吹打 20 次左到液体浑浊，无组织块为止。（5）离心过滤：将浑浊液体用 200 目的尼龙布过滤，然后进行离心，800 ×g，5 m掉上清，收集沉淀。（6）计数：将沉淀用 1 mLDMEM/F12 培养基吹打重悬，取 90 μL 细胞悬液和 1盼蓝溶液按照 9:1 比例混合，吹打混匀，取 10 μL 加到细胞计数板中，用细胞计数，即可得到活细胞的数量。（7）接种：细胞密度在 105个细胞/mL 左右接种在 25cm2的培养瓶内，培养基养。并且在培养瓶上作好标记，注明时间及日期，放入培养箱（37°C，5%CO2）养。隔天收集细胞悬液，1/3 换液，并放入新的细胞培养瓶中。原代培养的整个图 2-1 所示。
【参考文献】：
期刊论文
[1]谷氨酸和皮质酮诱导的PC12抑郁症细胞模型差异性的1H NMR代谢组学研究[J]. 何小燕,陈建丽,向欢,高耀,田俊生,秦雪梅,杜冠华. 药学学报. 2017(02)
[2]PI3K/Akt/GSK-3β/β-catenin信号通路促进神经细胞再生修复的研究进展[J]. 牛凯旋,刘思杨,冯猛,吕威力,邢雪松. 沈阳医学院学报. 2017(01)
[3]红花黄色素对谷氨酸/过氧化氢诱导的SH-SY5Y细胞凋亡保护作用[J]. 阮影影,徐慧,施晓萌,翟薇,张璐,胡艳丽. 石河子大学学报(自然科学版). 2016(03)
[4]脾气虚证大鼠cAMP-PKA信号通路基因表达变化及四君子汤干预作用[J]. 何丽娟,贾连群,张立德,王德山,单德红,宋囡,王艳杰,曲怡,杨关林. 中华中医药杂志. 2015(11)
[5]牛磺酸及其对中枢神经系统的保护作用[J]. 赵丽芳,李芳,刘敬,卢祖琳. 中华实用儿科临床杂志. 2015 (08)
[6]牛磺酸对缺氧再灌注斑马鱼幼鱼脑部内质网应激相关因子表达的影响[J]. 罗济璇,程燕,赵丹,陈衍晨,王斌. 临床儿科杂志. 2015(03)
[7]New insight in expression, transport, and secretion of brain-derived neurotrophic factor: Implications in brainrelated diseases[J]. Naoki Adachi,Tadahiro Numakawa,Misty Richards,Shingo Nakajima,Hiroshi Kunugi. World Journal of Biological Chemistry. 2014(04)
[8]活化Caspase 9在牛磺酸保护神经细胞中的保护作用[J]. 刘阳,王李瑶,张庆华,夏鹤春,孙涛. 医学研究生学报. 2014(08)
[9]成年海马神经元再生与抑郁症相关机制研究进展[J]. 金灿,张丹参,陈乃宏. 神经药理学报. 2013(02)
[10]牛磺酸对缺血-再灌注大鼠血浆心肌肌钙蛋白T及心肌GRP78、Caspase-12表达的影响[J]. 余乐涵,万慧芳,朱伟锋,涂硕,李华,胡炜华,曾昭建,万福生. 南昌大学学报(医学版). 2013(03)
博士论文
[1]激动素对谷氨酸诱导的HT22细胞氧化损伤干预作用及相关机制研究[D]. 魏云鹏.西北农林科技大学 2017
[2]牛磺酸调节cAMP-PKA-CREB信号通路活性促进生长受限胎鼠神经干细胞增殖的体内外实验研究[D]. 王燕.南方医科大学 2017
[3]低剂量辐射对成体神经干细胞增殖分化的刺激作用及其Wnt/β-catenin分子机制的研究[D]. 丁银秀.第四军医大学 2012
硕士论文
[1]牛磺酸对热应激致肉鸡主动脉内皮细胞损伤的保护作用研究[D]. 孙瑞媛.沈阳农业大学 2017
[2]牛磺酸对乙醇诱导大鼠肝细胞损伤的保护作用研究[D]. 吕灏.沈阳农业大学 2017
[3]牛磺酸对CUMS大鼠海马神经细胞凋亡及再生的作用研究[D]. 徐畅.沈阳农业大学 2017
[4]牛磺酸缓解大鼠慢性应激的作用研究[D]. 任双.沈阳农业大学 2016
[5]饲料牛磺酸对斜带石斑鱼TauT基因表达的影响[D]. 李家旭.集美大学 2016
[6]针刺对抑郁模型大鼠前额叶皮质ERK1/2-CREB-BDNF信号通路的影响[D]. 许明敏.北京中医药大学 2016
[7]补阳还五汤对脑缺血后伴抑郁大鼠脑内Notch信号通路的影响[D]. 张叶华.湖南中医药大学 2014
[8]牛磺酸对高糖诱导的内皮细胞凋亡的影响及其机制[D]. 梁栋.山西医科大学 2014
[9]谷氨酸经Shh信号转导通路介导成体神经干细胞增殖作用的研究[D]. 孟磊.新乡医学院 2014
[10]宫内生长受限抑制胎儿脑功能发育及孕鼠补充牛磺酸促进生长受限胎鼠神经元增殖研究[D]. 刘颖.安徽医科大学 2014
本文编号：2958405
【文章来源】：沈阳农业大学辽宁省
【文章页数】：67 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
抑郁症发病假说（Mlyniec，2015）
第一章 文献综述（1995）的实验中得到证实，所以说谷氨酸能功能障碍与抑郁症的发生密切相关 HPA 轴假说下丘脑-肾上腺-垂体轴（HPA）是神经内分泌系统的重要组成部分，调节应激反应，机体适应环境变化。也参与自身机体的各种活动，包括消化、运动、记忆以及情感等活动（Slavich and Irwin，2014）。下丘脑释放的激素首先促进垂体释放激素的释经 HPA 轴的传递，最终促进肾上腺激素的释放，反过来，肾上腺激素的增多会抑丘脑和垂体释放激素，正负调节共同维持机体平衡。动物机体面对各种应激环境条是导致抑郁症发生的首要原因。而当 HPA 轴被过度刺激并且发生功能亢进时，会丘脑神经元过多释放激素，最终使得机体糖皮质激素、盐皮质激素分泌增多，导致症的发生，如图 1-2 所示（Anacker and Hen，2017）。
（3）取材：为减少脑部的血液，将胎鼠垂直放置 1 min 左右，然后用手术剪鼠头剪断，沿着头部正中线剪开，掀开大脑皮质并将大脑暴露出来，用眼科镊子皮质剥开，取出左右两侧的海马体，放到加入双抗的 D-Hank’s 液中，冲洗干净。（4）机械消化：用 D-Hank’s 液将海马组织冲洗 1-2 次，将杂质洗干净，然Hank’s 液吸出，加入 DMEM/F12 培养基，用 5 mL 的枪头进行机械吹打 20 次左到液体浑浊，无组织块为止。（5）离心过滤：将浑浊液体用 200 目的尼龙布过滤，然后进行离心，800 ×g，5 m掉上清，收集沉淀。（6）计数：将沉淀用 1 mLDMEM/F12 培养基吹打重悬，取 90 μL 细胞悬液和 1盼蓝溶液按照 9:1 比例混合，吹打混匀，取 10 μL 加到细胞计数板中，用细胞计数，即可得到活细胞的数量。（7）接种：细胞密度在 105个细胞/mL 左右接种在 25cm2的培养瓶内，培养基养。并且在培养瓶上作好标记，注明时间及日期，放入培养箱（37°C，5%CO2）养。隔天收集细胞悬液，1/3 换液，并放入新的细胞培养瓶中。原代培养的整个图 2-1 所示。
【参考文献】：
期刊论文
[1]谷氨酸和皮质酮诱导的PC12抑郁症细胞模型差异性的1H NMR代谢组学研究[J]. 何小燕,陈建丽,向欢,高耀,田俊生,秦雪梅,杜冠华. 药学学报. 2017(02)
[2]PI3K/Akt/GSK-3β/β-catenin信号通路促进神经细胞再生修复的研究进展[J]. 牛凯旋,刘思杨,冯猛,吕威力,邢雪松. 沈阳医学院学报. 2017(01)
[3]红花黄色素对谷氨酸/过氧化氢诱导的SH-SY5Y细胞凋亡保护作用[J]. 阮影影,徐慧,施晓萌,翟薇,张璐,胡艳丽. 石河子大学学报(自然科学版). 2016(03)
[4]脾气虚证大鼠cAMP-PKA信号通路基因表达变化及四君子汤干预作用[J]. 何丽娟,贾连群,张立德,王德山,单德红,宋囡,王艳杰,曲怡,杨关林. 中华中医药杂志. 2015(11)
[5]牛磺酸及其对中枢神经系统的保护作用[J]. 赵丽芳,李芳,刘敬,卢祖琳. 中华实用儿科临床杂志. 2015 (08)
[6]牛磺酸对缺氧再灌注斑马鱼幼鱼脑部内质网应激相关因子表达的影响[J]. 罗济璇,程燕,赵丹,陈衍晨,王斌. 临床儿科杂志. 2015(03)
[7]New insight in expression, transport, and secretion of brain-derived neurotrophic factor: Implications in brainrelated diseases[J]. Naoki Adachi,Tadahiro Numakawa,Misty Richards,Shingo Nakajima,Hiroshi Kunugi. World Journal of Biological Chemistry. 2014(04)
[8]活化Caspase 9在牛磺酸保护神经细胞中的保护作用[J]. 刘阳,王李瑶,张庆华,夏鹤春,孙涛. 医学研究生学报. 2014(08)
[9]成年海马神经元再生与抑郁症相关机制研究进展[J]. 金灿,张丹参,陈乃宏. 神经药理学报. 2013(02)
[10]牛磺酸对缺血-再灌注大鼠血浆心肌肌钙蛋白T及心肌GRP78、Caspase-12表达的影响[J]. 余乐涵,万慧芳,朱伟锋,涂硕,李华,胡炜华,曾昭建,万福生. 南昌大学学报(医学版). 2013(03)
博士论文
[1]激动素对谷氨酸诱导的HT22细胞氧化损伤干预作用及相关机制研究[D]. 魏云鹏.西北农林科技大学 2017
[2]牛磺酸调节cAMP-PKA-CREB信号通路活性促进生长受限胎鼠神经干细胞增殖的体内外实验研究[D]. 王燕.南方医科大学 2017
[3]低剂量辐射对成体神经干细胞增殖分化的刺激作用及其Wnt/β-catenin分子机制的研究[D]. 丁银秀.第四军医大学 2012
硕士论文
[1]牛磺酸对热应激致肉鸡主动脉内皮细胞损伤的保护作用研究[D]. 孙瑞媛.沈阳农业大学 2017
[2]牛磺酸对乙醇诱导大鼠肝细胞损伤的保护作用研究[D]. 吕灏.沈阳农业大学 2017
[3]牛磺酸对CUMS大鼠海马神经细胞凋亡及再生的作用研究[D]. 徐畅.沈阳农业大学 2017
[4]牛磺酸缓解大鼠慢性应激的作用研究[D]. 任双.沈阳农业大学 2016
[5]饲料牛磺酸对斜带石斑鱼TauT基因表达的影响[D]. 李家旭.集美大学 2016
[6]针刺对抑郁模型大鼠前额叶皮质ERK1/2-CREB-BDNF信号通路的影响[D]. 许明敏.北京中医药大学 2016
[7]补阳还五汤对脑缺血后伴抑郁大鼠脑内Notch信号通路的影响[D]. 张叶华.湖南中医药大学 2014
[8]牛磺酸对高糖诱导的内皮细胞凋亡的影响及其机制[D]. 梁栋.山西医科大学 2014
[9]谷氨酸经Shh信号转导通路介导成体神经干细胞增殖作用的研究[D]. 孟磊.新乡医学院 2014
[10]宫内生长受限抑制胎儿脑功能发育及孕鼠补充牛磺酸促进生长受限胎鼠神经元增殖研究[D]. 刘颖.安徽医科大学 2014
本文编号：2958405
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