MicroRNA-153在阿尔茨海默病模型鼠发病机制中的作用

发布时间：2021-01-16 01:02

　　阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease, AD）是一种神经退行性变,是老年痴呆的主要类型,病理表现以老年斑、神经纤维缠结为主。随着现代社会人口老龄化趋势的迅速增长,老年性疾病特别是老年痴呆发病率呈上升趋势,严重影响老年人的生存质量,然而,AD是一种多因素的复杂性疾病,其病因及发病机制迄今尚不明确。MicroRNA （miRNA）是一类长约22个核苷酸的内源性小分子RNA,通过抑制转录后mRNA的翻译而调控蛋白表达。越来越多的研究表明在多种疾病的发生中miRNA均发挥着重要作用。其中,miRNA参与AD发病机制的文章也日见报道,然而,相关方面的研究尚处于初步阶段,进一步探讨AD发病过程中异常表达的miRNA及其作用不仅可为AD发病机制提供新的诠释且有望为治疗提供新的途径。APP （Amyloid protein precursor）是Aβ肽的前体蛋白,其表达水平的增加可直接导致Aβ肽生成增多从而成为AD的主要致病基因。APP属于一类高度保守的跨膜糖蛋白家族,哺乳动物的该家族成员还包括有APLP1和APLP2。多方研究证实APLP2在AD的发病机制中也起着重要作用。本课题通过... 

【文章来源】：北京协和医学院北京市 211工程院校 985工程院校

【文章页数】：110 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
中文摘要
ABSTRACT
前言
    AD的发病机制
        1. 基因突变
        2. Aβ淀粉样肽假说
        3. Tau蛋白假说
        4. 胆固醇代谢异常
        5. 氧化应激
    MicroRNA
        1. miRNA的基因定位及表达调控
        2. miRNA的生物合成
        3. miRNA靶基因的鉴定
        4. miRNA研究新进展
    miRNA与神经系统
        1. miRNA在神经系统中的表达
        2. miRNA和神经系统的分化发育
        3. miRNA和脑的生理功能
    mciorRNA与AD
        1. AD患者脑内miRNA表达谱的改变
        2. miRNA调控AD致病基因的表达
    APP蛋白家族
    展望
第一部分 microRNA在阿尔茨海默病中的作用研究
    一. 材判
        1. 实验动物
        2. 主要生化试剂
        3. 主要溶液配置
        4. 主要仪器设备
    二. 实验方法
        1 APPswe/PS△E9转基因小鼠模型的制备和鉴定
        2. MicroRNA芯片
        3. Real-Time Reverse Transcriptase （RT） PCR
        4. miR-153表达载体的制备
        5. miR-153稳转细胞系的建立和鉴定
        6. 瞬时共转染
        7. 氧化应激及Aβ肽毒性损伤细胞模型的制作
        8. miR-153稳转细胞系增殖活性的检测
        9. miR-153稳转细胞系凋亡水平的检测
        10. miR-153靶基因的预测
        11. APP-3’UTR、APLP2-3’UTR荧光素酶报告载体的构建
        12. 荧光素酶活性检测实验
        13. 免疫印迹（Western blot）
        14. 统计学分析
    三.结果
        1. APPswe/PSΔE9转基因鼠鼠尾鉴定结果
        2. microRNA芯片检测结果
        3. 组织及细胞RNA质量的鉴定
        4. Real-time PCR检测AD小鼠脑组织中miR-153的表达
        5. miR-153靶基因的预测
        6. miR-153与靶基因3’UTR区的相互作用
        7. APPswe/PSΔE9转基因小鼠脑内APP、APLP2的表达
        8. miR-153对APP和APLP2表达水平的调控作用
2O₂对miR-153表达水平的影响">        9. Aβ42肽和H₂O₂对miR-153表达水平的影响
        10. 高表达miR-153对下游信号分子的影响
    四.讨论
        1. miRNAs与AD发病机制的研究现状
        2. APPswe/PSAE9双转基因鼠脑内miR-153的异常表达
        3. miR-153靶基因的预测及鉴定
        4. APP蛋白家族与AD
        5. miRNAs的表达调控
        6. miR-153对靶基因下游信号分子的影响
第二部分 miR-153转基因小鼠的建立和分析
    一.实验方法
        1. miR-153转基因小鼠的制备
        2. 转基因阳性鼠基因型的PCR鼠尾鉴定
        3. Real-time PCR检测转基因鼠miR-153的表达
        4. Western-blot检测miR-153靶基因的表达
    二.结果
        1. PCR鼠尾鉴定miR-153转基因小鼠
        2. Real-time PCR检测转基因鼠miR-153的表达水平
        3. 转基因鼠脑内miR-153靶蛋白表达水平的检测
        4. 脑生理发育过程中miR-153与APP、APLP2的共表达
    三.讨论
小结
参考文献
附录
缩写表
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]我国阿尔茨海默病的研究现状及展望[J]. 洪震.  中华神经科杂志. 2001(04)



本文编号：2979843