GalR2基因的表达及对小鼠抑郁症影响的初步探讨

发布时间：2021-01-26 16:23

　　本研究构建GalR2（galanin receptor 2,甘丙肽受体2）真核表达质粒pEGFP -GalR2,在转录及翻译水平鉴定了GalR2基因的表达,确定了GalR2基因表达产物的细胞内定位。同时建立C57BL/6J小鼠抑郁症模型,并初步探讨了GalR2蛋白对小鼠抑郁症的影响。第一部分GalR2基因的获取、真核表达载体构建及细胞内表达鉴定和定位目的:获取GalR2基因全长编码序列,构建GalR2基因真核表达质粒,并在Hela细胞中表达,荧光显微镜观察其细胞内定位。方法:从C57BL?6J小鼠海马组织提取总RNA,以RT-PCR法调取GalR2基因编码序列,上下游引入EcoRⅠ、BamHⅠ酶切位点,克隆至pEGFP-C1,构建重组真核表达质粒pEGFP-GalR2,经PCR、酶切、测序鉴定正确后,脂质体转染至Hela细胞。RT-PCR,Western blotting分别在转录及翻译水平检测GalR2基因的表达,荧光显微镜观察融合蛋白细胞内定位。结果:从C57BL?6J小鼠海马组织扩增出大小为1116bp的GalR2基因片段。重组质粒经PCR、酶切鉴定和测序分析,表明构建正确。通过... 

【文章来源】：重庆医科大学重庆市

【文章页数】：54 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

暴露健康C57BL/6J小鼠海马组织

增强化学发光（ECL）法显影：取化学发光试剂 A 液和 B 液各 500 微升按 1:1 混合，避光放置。将化学发光液均匀滴加在 PVDF 膜上，吸去多余的化学发光试剂，通过 ChemiDocXRS 化学发光成像系统，采集图像。⑶ 应用荧光显微镜观察 GalR2 基因蛋白水平表达及细胞内定位：细胞转染后 24h，将细胞置于倒置荧光显微镜下观察融合蛋白的表达及其亚细胞定位，并采集图像。2 实验结果2.1 C57BL/6J 小鼠海马组织总 RNA 的提取⑴ 摘取健康 C57BL/6J 小鼠海马组织成功剥离健康 C57BL/6J 小鼠脑组织，暴露并分离海马（图 1-2）。

C57BL/6J mouse hippocampus total RNAC57BL/6J 小鼠海马组织总 RNA 琼脂糖凝胶电 Result of C57BL/6J mouse hippocampus tota结果琼脂糖凝胶电泳后，在约 1116bp 处可见大小相符（图 4），在约 445 bp 处的特相符（图 5）。

【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3001435