骨髓间充质干细胞移植对血管性痴呆模型大鼠脑源性神经生长因子的影响

发布时间：2021-02-12 12:12

　　第一部分大鼠骨髓间充质干细胞的分离、培养和鉴定【目的】探讨大鼠骨髓间充质干细胞（Mesenchymal stem cells, MSCs）的体外分离、纯化、传代、鉴定,为进行细胞移植提供功能稳定的种子细胞。【方法】无菌条件下取幼年SD大鼠的股骨,采用全骨髓培养结合细胞贴壁法分离纯化MSCs。待细胞生长铺满塑料瓶底80%-90%左右时,用0.25%胰蛋白酶控制消化30-60S后进行传代。倒置相差显微镜下观察原代及传代后的细胞的形态。通过向骨细胞分化诱导方法对扩增后的MSCs进行鉴定。【结果】大鼠MSCs在体外可以分离培养扩增,分离培养的MSCs形态呈长梭形,为贴壁生长的成纤维样细胞,传代后的细胞形态趋于均一。经诱导MSCs能分化为成骨细胞,茜素红S可见钙结节阳性。【结论】全骨髓培养结合细胞贴壁法可以成功的建立大鼠MSCs体外分离和培养体系,且培养的MSCs纯度高,活力强,性状稳定。MSCs具有多向分化潜能,可通过诱导向成骨细胞分化。第二部分血管性痴呆大鼠模型的制备【目的】探讨制备理想的血管性痴呆（Vascular dementia,VD）动物模型方法。【方法】采用间隔7天先后结扎双侧的颈... 

【文章来源】：广西医科大学广西壮族自治区

【文章页数】：67 页

【学位级别】：硕士

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前言
第一部分 大鼠骨髓间充质干细胞的分离、培养和鉴定
    1 材料与方法
        1.1 材料
        1.2 方法
    2 结果
        2.1 MSCs的原代和传代培养
        2.2 生长曲线的绘制
        2.3 MSCs 向成骨细胞分化的诱导
    3 讨论
第二部分 血管性痴呆大鼠模型的制备
    1 材料和方法
        1.1 主要仪器设备
        1.2 M o r r i s 水迷宫行为学检测
        1.3 实验动物及分组
        1.4 VD 模型的制作
        1.5 统计学方法
    2 结果
        2.1 实验动物一般情况
        2.2 VD 模型行为学检测结果
    3 讨论
第三部分 大鼠骨髓间充质干细胞移植 对血管性痴呆大鼠模型的疗效观察及 BDNF 检测
    1 材料
        1.1 实验动物分组及处理
        1.2 主要仪器和试剂
    2 方法
        2.1 MSCs 的标记和计数
        2.2 行为学检测
        2.3 脑脊液的采集
        2.4 海马和额叶皮质组织匀浆制备
        2.5 ELISA 法测定 BDNF 浓度
        2.6 统计学分析
    3 结果
        3.1 MSCs移植对VD大鼠学习记忆的影响
        3.2 B D N F 标准曲线的制作
        3.3 BDNF 的含量变化
    4 讨论
结论
参考文献
综述
致谢


【参考文献】：
期刊论文
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[2]荧光染料CFSE标记大鼠间充质干细胞的体外研究[J]. 李艳菊,邓兰,黄睿,郭坤元.  南方医科大学学报. 2009(01)
[3]Immunosuppressive effects of rat mesenchymal stem cells:involvement of CD4+ CD25+ regulatory T cells[J]. Zhou Ye,Yan Wang,Hai-Yang Xie and Shu-Sen Zheng Key Laboratory of Combined Multi-organ Transplantation,Ministry of Public Health;Key Laboratory of Organ Transplantation,Zhejiang Province;and Department of Hepatobiliary and Pancreatic Surgery,First Affiliated Hospital,Zhejiang University School of Medicine,Hangzhou 310003,China.  Hepatobiliary & Pancreatic Diseases International. 2008(06)
[4]大鼠血管性痴呆模型的改良[J]. 郑敏,赵骥,陈红光,王帮华,鲍翠玉.  咸宁学院学报(医学版). 2008(04)
[5]骨髓间充质干细胞移植对脑梗塞大鼠神经功能恢复及突触素表达的影响[J]. 翁金森,刘楠,杜厚伟,陈荣华,张逸仙,王杰华,黄华品.  细胞与分子免疫学杂志. 2008(01)
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[7]经皮穿刺延髓池抽取兔和大鼠脑脊液的方法[J]. 富宏,陶迎红,王学美,杨金霞,刘庚信.  中国比较医学杂志. 2006(11)
[8]Effects of Co-grafts Mesenchymal Stem Cells and Nerve Growth Factor Suspension in the Repair of Spinal Cord Injury[J]. 方煌,王俊芳,陈安民.  华中科技大学学报(医学英德文版). 2006(02)
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本文编号：3030847