背外侧纹状体微小RNA对甲基苯丙胺成瘾的调控作用

发布时间：2021-05-24 16:02

　　甲基苯丙胺（methamphetamine,MA）滥用在我国乃至世界范围内增长迅猛。.相比于海洛因、可卡因等传统毒品,MA的成瘾性更强、中枢神经系统损害更严重,但对MA成瘾的研究较为滞后,国内外尚无批准的治疗药物。药物成瘾是从偶然用药、规律性用药转变为强迫性用药的连续过程,其中强迫性用药是成瘾的核心特征。目前研究认为这一转换的行为学基础是由目标导向性逐渐向习惯化过渡,涉及到的核团主要是.以伏隔核（nucleus accumbens,NAc）为核心的腹侧纹状体（ventral striatum,vStr）对行为的控制逐渐让位于背侧纹状体（dorsalstriatum,dStr）特别是背外侧纹状体（dorsolateralstriatum,dlStr）,然而其中的细胞分子基础尚不清楚。因此,研究规律性用药转化为强迫性用药的细胞及分子机制是阐明MA成瘾机制的关键。.微小RNA（microRNA,miRNA）是一类在转录后水平调控基因表达的非编码RNA。研究表明miRNA表达异常与可卡因、阿片和酒精成瘾有关,但关于miRNA与MA成瘾的报道较少,尤其是与强迫性用药相关的研究基本处于空白。本课题... 

【文章来源】：军事科学院北京市

【文章页数】：151 页

【学位级别】：博士

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缩略语表
摘要
Abstract
前言
第一章 大鼠背外侧纹状体miR-30a对甲基苯丙胺成瘾行为的调节作用
    第一节 miR-30a与大鼠甲基苯丙胺强迫性用药行为的相关性
        1. 研究背景
        2. 材料和方法
            2.1 甲基苯丙胺诱发的大鼠主动给药和被动给药模型的建立
                2.1.1 建立甲基苯丙胺诱发的大鼠自身给药模型
                2.1.2 建立甲基苯丙胺诱发的大鼠被动给药模型
                2.1.3 取材
            2.2 实时荧光定量PCR检测纹状体各亚区miR-30a的表达变化规律
                2.2.1 miRNA的提取
                2.2.2 miRNA经茎环引物反转录成cDNA
                2.2.3 实时定量PCR扩增
            2.3 LV-miR-30a病毒包装与整体动物水平验证
                2.3.1 LV-miR-30a慢病毒的制备
                2.3.2 实时荧光定量PCR检测LV-miR-30a在整体动物水平的有效性
                2.3.4 免疫荧光实验观察LV-miR-30a的表达
            2.4 miR-30a对甲基苯丙胺诱发的大鼠自身给药行为的影响
                2.4.1 大鼠颈静脉插管以及脑立体定位注射病毒手术
                2.4.2 甲基苯丙胺诱发的大鼠自身给药训练
                2.4.3 实时荧光定量PCR检测纹状体中miR-30a的表达变化
        3. 结果
            3.1 甲基苯丙胺诱导miR-30a的差异表达特征
                3.1.1 甲基苯丙胺诱发的大鼠规律性用药和强迫性用药模型
                3.1.2 主动给药模型下纹状体各亚区miR-30a的表达变化规律
                3.1.3 被动给药模型下纹状体各亚区miR-30a的表达变化规律
            3.2 LV-miR-30a在dIStr中选择性上调miR-30a表达
            3.3 上调dlStr miR-30a表达水平降低甲基苯丙胺诱发的大鼠强迫性用药行为
        4. 讨论
        5. 小结
    第二节 dlStr miR-30a参与甲基苯丙胺强迫性用药的机制研究
        1. 研究背景
        2. 材料和方法
            2.1 miR-30a的预测靶基因及生物信息学分析
                2.1.1 miRNA预测靶基因的获取
                2.1.2 生物信息学分析
            2.2 双荧光素酶报告基因验证miR-30a与预测靶基因的靶向关系
                2.2.1 构建BDNF基因3'-UTR双荧光素酶报告载体
                2.2.2 Luciferase荧光测定
            2.3 主动给药模型中miR-30a靶基因的差异表达
                2.3.1 RT-qPCR检测miR-30a靶基因mRNA水平的表达
                2.3.2 WB检测miR-30a靶基因蛋白水平的表达
            2.4 获得有效的LV-sh-Tnrc6a病毒
                2.4.1 在细胞水平筛选下调Tnrc6a的shRNA序列
                2.4.2 整体动物水平验证LV-sh-Tnrc6a的有效性
            2.5 Tnrc6a对甲基苯丙胺诱发的大鼠自身给药行为的影响
                2.5.1 大鼠颈静脉插管以及脑立体定位注射病毒手术
                2.5.2 甲基苯丙胺诱发的大鼠自身给药训练
                2.5.3 Western Blot检测大鼠dlStr中Tnrc6a的表达变化
            2.6 获得有效的LV-sh-BDNF病毒
                2.6.1 在细胞水平筛选下调BDNF的shRNA序列
                2.6.2 整体动物水平验证LV-sh-BDNF的有效性
            2.7 BDNF对甲基苯丙胺诱发的大鼠自身给药行为的影响
                2.7.1 大鼠颈静脉插管以及脑立体定位注射病毒手术
                2.7.2 甲基苯丙胺诱发的大鼠自身给药训练
                2.7.3 Western Blot检测大鼠dIStr中BDNF的表达变化
            2.8 主动给药模型中BDNF下游通路关键分子的表达变化
                2.8.1 甲基苯丙胺诱发的大鼠自身给药模型的建立
                2.8.2 Western Blot检测纹状体中BDNF下游通路中关键分子的表达变化
            2.9 BDNF下游通路对甲基苯丙胺诱发的大鼠自身给药行为的影响
                2.9.1 溶液配制
                2.9.2 大鼠颈静脉插管以及脑立体定位埋管手术
                2.9.3 甲基苯丙胺诱发的大鼠长时程自身给药训练
        3. 结果
            3.1 miR-30a靶基因预测及验证
                3.1.1 miR-30a预测靶基因的生物信息学分析
                3.1.2 双荧光素酶报告基因验证miR-30a的预测靶分子
            3.2 甲基苯丙胺诱导miR-30a靶分子的差异表达特征
            3.3 miR-30a靶分子Tnrc6a与甲基苯丙胺诱发的大鼠自身给药行为的相关性
                3.3.1 LV-sh-Tnrc6a在dIStr中选择性下调Tnrc6a表达
                3.3.2下调dlStr Tnrc6a表达水平不影响甲基苯丙胺诱发的大鼠强迫性用药行为
            3.4 miR-30a靶分子BDNF与甲基苯丙胺诱发的大鼠自身给药行为的相关性
                3.4.1 LV-sh-BDNF在dlStr中选择性下调BDNF表达
                3.4.2 下调dlStr BDNF表达水平能降低甲基苯丙胺诱发的大鼠强迫性用药行为
            3.5 BDNF下游通路对甲基苯丙胺诱发的大鼠自身给药行为的影响
                3.5.1 规律性用药及强迫性用药模型下BDNF下游通路关键分子的差异表达特征
                3.5.2 ERK通路抑制剂U0126不影响甲基苯丙胺诱发的大鼠自身给药行为
                3.5.3 PI3K通路抑制剂LY294002能降低甲基苯丙胺诱发的大鼠自身给药行为
        4. 讨论
        5. 小结
    第三节 miR-30a与线索诱发的大鼠复吸行为的相关性
        1. 研究背景
        2. 材料和方法
            2.1 miR-30a及靶分子BDNF在线索诱发的大鼠复吸模型中的表达变化
                2.1.1 建立甲基苯丙胺诱发的大鼠复吸模型
                2.1.2 RT-qPCR检测dlStr中miR-30a及其靶分子BDNF的表达变化
        3. 结果
            3.1 大鼠复吸倾向与miR-30a及其靶分子BDNF表达水平的相关性
        4. 讨论
        5. 小结
第二章 大鼠背外侧纹状体miR-134对甲基苯丙胺成瘾行为的调节作用
    1. 研究背景
    2. 材料和方法
        2.1 主动给药和被动给药模型中miR-134及其靶分子LIMK1的差异表达
            2.1.1 RT-qPCR检测miR-134及其靶分子LIMK1 mRNA水平的表达变化
            2.1.2 Western Blot检测LIMK1蛋白水平的表达变化
        2.2 双荧光素酶报告基因验证miR-134海绵体的有效性
            2.2.1 LIMK1 基因 3’-UTR 双荧光素酶报告载体的构建
            2.1.2 Luciferase荧光测定
        2.3 免疫荧光观察LV-miR-134-sil病毒的表达
        2.4 下调dlStr miR-134对甲基苯丙胺诱发的大鼠自身给药行为的影响
            2.4.1 甲基苯丙胺诱发的大鼠自身给药模型的建立
            2.4.2 RT-qPCR检测dlStr中miR-134的表达变化
            2.4.2 Western Blot检测dlStr中LIMK1的表达变化
    3. 结果
        3.1 甲基苯丙胺诱导miR-134及其靶分子LIMK1的差异表达特征
            3.1.1 甲基苯丙胺强迫性用药大鼠dIStr中miR-134表达上调其靶分子LIMK1表达下调
            3.1.2 甲基苯丙胺被动给药不改变大鼠dlStr miR-134及其靶分子LIMK1的表达
        3.2 干预miR-134表达水平对甲基丙胺自身给药行为的影响
            3.2.1 miR-134海绵体功能性下调miR-134的表达
            3.2.2 下调dIStr miR-134表达水平降低甲基苯丙胺诱发的大鼠强迫性用药行为
    4. 讨论
    5. 小结
第三章 结论与展望
参考文献
作者在学期间取得的学术成果
在读期间发表的代表性论著
主要简历
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]MicroRNAs of microglia: wrestling with central nervous system disease[J]. Xiao-Hua Wang,Tian-Long Wang.  Neural Regeneration Research. 2018(12)
[2]甲基苯丙胺诱导大鼠不可控制性自身给药行为模型的建立[J]. 陈瑛,曹丹旎,金雪峰,吴宁,宋睿,李锦.  国际药学研究杂志. 2013(03)

博士论文
[1]超极化激活环核苷酸门控阳离子（HCN）通道对甲基苯丙胺成瘾的调节作用及机制研究[D]. 曹丹旎.中国人民解放军军事医学科学院 2016



本文编号：3204463