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Lin28B调控的骨髓间充质干细胞对阿尔茨海默病模型的神经保护作用

发布时间:2021-07-19 15:26
  背景阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)是一种与年龄相关的神经系统退行性疾病,也是造成人类死亡的第六大常见原因。虽然目前已有大量的基础研究及临床前实验探讨其致病机制及潜在治疗靶点,但目前仍缺乏安全有效的治疗策略。近年来,间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSCs)移植成为治疗AD的一种有前景的治疗方法。然而,移植的MSCs在AD脑组织微环境中增殖能力差、存活率低,限制了其治疗效果。Lin28B是一种高度保守的RNA结合蛋白,可促进多种干细胞的自我更新和存活能力,但目前对lin28B是否能促进移植的MSCs在AD中的存活尚无研究。目的探讨lin28B是否可促进移植的MSCs的存活,使之能够在AD脑组织微环境内长期存活并发挥神经保护作用。材料与方法1.从6周龄C57BL/6J雄性小鼠股骨中提取MSCs,利用全骨髓培养法分离培养MSCs,留取4-10代MSCs备用。2.构建lin28B过表达慢病毒载体和空病毒载体,并转染至MSCs中。将MSCs分为三组:lin28B MSCs(lin28B 过表达 MSCs 组)、vector MSCs(载体... 

【文章来源】:郑州大学河南省 211工程院校

【文章页数】:62 页

【学位级别】:硕士

【部分图文】:

Lin28B调控的骨髓间充质干细胞对阿尔茨海默病模型的神经保护作用


图2:过表达lin28B促进MSCs增殖和迁移能力

细胞周期分布,慢病毒,转染,过表达


?结果???(3)?Bright?field?Flourescent?field?Merge??图1:慢病毒转染MSCs。⑶荧光显微镜观察lin28B过表达MSCs和载体组MSCs的转染??效率(比例尺为HKHim)。Lin28B:过表达lin28B?MSCs;?Vector:转染空病毒载体的MSCs;??Bright?field:光镜视野;Florescent?field:荧光视野。??(a)?|?(b>?(c)?|?(d)?cck-8??Ir]|?參I:]?)??!i°?I?—-GA_ti。■?〇H???嘗、,VV。?W?uayp??(e)?〇??UAlAL?libiE??0?50?100?150?200?0?50?100?150?200?250?0?50?100?150?200?250?r>?^?j??FL2-A?PE-A?FL2-A?PE-A?FL2-A?PE-A?^?^t>??⑴??Lin28B?Vector?Control??〇hHEHBHB??4°?I?^??图2:过表达lin28B促进MSCs增殖和迁移能力。(a)?qRT-PCR检测各组MSCs中lin28B??mRNA表达水平(n=3)。(b,?c)?Western?blots检测各组MSCs中lin28B蛋白表达水平(n=3)。??(d)?CCK-8检测各组MSCs增殖能力(n=5)。(e)流式细胞数检测细胞周期分布(n=3)。⑴划??痕实验和transwell实验检测各组MSCs迁移能力(比例尺为丨0〇nm),p?<?0.05,***p?<?0.001??GAPDH:磷酸甘油醛脱氢酶。??21??

凋亡,象限,凋亡细胞


??'?^?'■?^??<?APC??(b)?(c)??—2”?_?^?CO-丨二=3?一一義■???t?_?Lin28B?K??^?15-?丄?T?v?Vector??謹1〇?I?Con,rol?caspase-3??i:iil?“i?圆義?_???early?apoptosis?late?apoptosis?necrosis?Lin28B?Vector?Control??(d)?(e)?g?1.〇l??lili?III!??—/?y?c/?/c/??图3:?Lin28B可增强经AP142处理的MSCs的抗凋亡能力。(a,b)?AP卜42处理各组MSCs?48h??后,用流式细胞仪检测各组细胞凋亡比例。(存活细胞:左上象限;早期凋亡细胞:右下象??限;晚期凋亡细胞:右上象限;坏死细胞,左上象限)n?=?3^c-e)?Western?blots法检测经API42??处理后各组?MSCs?中?cleaved?caspase?3?和?caspase?3?蛋白的表达情况。*p?<?0.05,?**p?<?0_01,??***p?<?0.001.?Lin28B:?lin28B?过表达?MSCs;?Vector:载体组?MSCs;?Contro丨:对照组?MSCs。??22??

【参考文献】:
期刊论文
[1]Nanocarriers as a powerful vehicle to overcome blood-brain barrier in treating neurodegenerative diseases: Focus on recent advances[J]. Xiaoqian Niu,Jiejian Chen,Jianqing Gao.  Asian Journal of Pharmaceutical Sciences. 2019(05)
[2]Exosome-based small RNA delivery:Progress and prospects[J]. Mei Lu,Haonan Xing,Zhe Xun,Tianzhi Yang,Pingtian Ding,Cuifang Cai,Dongkai Wang,Xiaoyun Zhao.  Asian Journal of Pharmaceutical Sciences. 2018(01)



本文编号:3290941

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