大鼠2型糖尿病后抑郁对海马细胞凋亡和Bad、Bcl-xL的影响

发布时间：2017-04-27 19:07

  本文关键词：大鼠2型糖尿病后抑郁对海马细胞凋亡和Bad、Bcl-xL的影响，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的： 探索2型糖尿病伴发抑郁的可能机制,为临床上2型糖尿病合并抑郁的预防和治疗提供借鉴和帮助。通过分子水平干预糖尿病后抑郁的发生,提高糖尿病患者的生活质量。本研究采用高脂高糖饮食结合链脲佐菌素(STZ)腹腔注射法制作2型糖尿病模型,采用慢性不可预见温和应激方法制作抑郁模型,采用高脂高糖饮食结合链脲佐菌素(STz)腹腔注射法和慢性不可预见温和应激方法制作2型糖尿病后抑郁模型。观察糖尿病大鼠、抑郁大鼠及糖尿病合并抑郁大鼠的行为学改变,海马细胞凋亡相关因子Bad, Bcl-xL表达以及海马细胞凋亡形态学的改变,探探讨2型糖尿病合并抑郁可能的发病机制。 方法： 将50只成年健康雄性sD大鼠随机分成实验对照组(10只)、2型糖尿病组(15只)、单纯抑郁组(10只)、2型糖尿病合并抑郁组(15只),以高脂高糖饮食加腹腔注射链尿佐菌素复制2型糖尿病大鼠模型,慢性不可预见温和应激方法制作抑郁模型,两者结合建立2型糖尿病后抑郁模型,观察其体重、二便、饮食、血糖等一般情况,行旷场实验及强迫游泳实验对其进行行为学检测,通过HE染色观察实验各组大鼠脑海马细胞形态学改变,用免疫组化法检测各组大鼠海马细胞Bad, Bcl-xL的表达,用TUNEL法检测各组大脑海马细胞凋亡情况,最后采用配对t检验；单因素方差分析,配对样本t检验等统计学方法进行数据分析以及观察脑组织的病理变化。 结果： 1.高脂高糖饮食喂养期间,实验各组动物体重稳定增长,注射STZ制作糖尿病模型后,慢性不可预见温和应激方法制作抑郁模型期间,糖尿病组、单纯抑郁组、合并抑郁组大鼠体重均有下降,糖尿病组大鼠饮水及摄食量显著增多,血糖明显升高(P0.01,P0.05),尿量增多,旷场实验水平得分明显下降(P0.01,P0.05),。单纯抑郁组大鼠体重下降明显(P0.01,P0.05),旷场实验水平得分和垂直得分均明显下降(P0.01,P0.05),强迫游泳实验测定其游泳时间明显减少(P0.01,P0.05),静止不动时间明显增加(P0.01,P0.05)。合并抑郁组大鼠体重较其余各组显著下降,尿量显著增加,血糖显著升高(P0.01,P0.05),旷场实验测定水平得分和垂直得分显著下降(P0.01,P0.05),强迫游泳实验测定其游泳时间明显较其余各组减少(P0.01,P0.05),静止不动时间比其余各组增加显著(P0.01,P0.05)。 2.通过HE染色观察实验各组大鼠脑海马细胞形态学改变：合并抑郁组大鼠海马神经元细胞明显减少,细胞层次紊乱,部分细胞坏死。 3.通过免疫组化法检测实验各组大鼠脑海马Bad, Bcl-xL的表达：糖尿病组大鼠脑海马细胞表达Bad水平较对照组明显增高(P0.01,P0.05),表达Bcl-xL水平与对照组无明显差异。单纯抑郁组大鼠脑海马细胞表达Bad较对照组明显增高(P0.01,P0.05),表达Bcl-xL水平较对照组明显下降(P0.01,P0.05),合并抑郁组大鼠脑海马中Bad表达水平较其余各组明显增高,Bcl-xL表达水平明显下降(P0.01,P0.05)。 4.通过TUNEL法检测实验各组大鼠脑海马细胞凋亡情况：糖尿病组大鼠海马细胞凋亡数较对照组显著增加(P0.01,P0.05),单纯抑郁组大鼠海马细胞凋亡数与对照组无明显差异,合并抑郁组大鼠脑海马中细胞凋亡数较其余各实验组显著增加(P0.01,P0.05) 结论： 1.合并抑郁组大鼠体重下降明显,血糖显著增高,说明2型糖尿病合并抑郁症加重糖代谢紊乱。 2.合并抑郁组大鼠行为学测试,旷场实验水平得分及垂直得分显著下降,强迫游泳实验静止时间显著增加,游泳时间显著减少,说明2型糖尿病合并抑郁症能使行为活动程度减少,探究能力下降,绝望程度增加。 3.2型糖尿病合并抑郁组脑海马细胞Bad阳性细胞计数结果较其余各实验组相应部位的结果明显增加,Bcl-xL阳性细胞计数结果较其余各实验组相应部位的结果明显减少。脑海马神经细胞凋亡数较其余各实验组显著增加,提示2型糖尿病合并抑郁症可以促进细胞凋亡相关蛋白Bad促凋亡蛋白表达的上调,Bcl-xL抑制细胞凋亡蛋白表达的下降,促进神经元凋亡的发生,从而证实神经元凋亡可能是2型糖尿病合并抑郁症发病的一种机制。
【关键词】：2型糖尿病 抑郁障碍 行为学 Bad蛋白 Bcl-xL蛋白 细胞凋亡 细胞信号转导
【学位授予单位】：昆明医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R587.1;R749.4
【目录】：

• 中文摘要8-11
• Abstract11-14
• 引言(Introduction)14-17
• 材料与方法(Subjects and methods)17-25
• 1 材料17-19
• 1.1 实验动物及其喂养17
• 1.1.1 实验动物17
• 1.1.2 实验动物生活条件17
• 1.1.3 实验动物喂养饲料17
• 1.2 主要实验仪器17-18
• 1.3 主要实验试剂18-19
• 2 实验方法19-24
• 2.1 动物分组19
• 2.2 动物模型的建立19-20
• 2.2.1 2型糖尿病模型的建立19
• 2.2.1.1 2型糖尿病判断标准19
• 2.2.2 抑郁模型的建立19-20
• 2.3 行为学观察的指标及其方法20-21
• 2.3.1 为证实2型糖尿病鼠模型成功与否检测下列项目20-21
• 2.3.1.1 实验动物成模率及死亡率20
• 2.3.1.2 一般状况20
• 2.3.1.3 血糖的测定20
• 2.3.1.4 旷场实验测定20-21
• 2.3.1.4.2 旷场实验的方法与步骤21
• 2.3.1.4.3 旷场实验的观察指标21
• 2.3.1.5 强迫游泳实验测定21
• 2.4 动物取材HE染色检测海马形态学改变21-22
• 2.4.1 动物取材21-22
• 2.4.2 HE染色22
• 2.5 动物取材免疫组化染色,检测海马中Bad及Bcl-xL阳性细胞数22-24
• 2.5.1 测定原理22
• 2.5.2 实验步骤22-23
• 2.5.3 细胞凋亡检测23-24
• 2.5.4 图像分析24
• 3 统计学处理24-25
• 结果(Results)25-48
• 1 实验动物成模率及死亡率25
• 2 一般状况25-26
• 附表26-48
• 讨论(Discussion)48-61
• 1 动物模型的建立48-52
• 1.1 实验动物的选择48
• 1.2 2型糖尿病模型的选择48-49
• 1.2.1 2型糖尿病模型建立成功的鉴定49
• 1.2.2 2型糖尿病模型制作注意事项49
• 1.3 抑郁模型的选择49-51
• 1.4 抑郁症行为学评价51-52
• 1.4.1 体重测量51
• 1.4.2 旷场实验评价及注意事项51
• 1.4.3 强迫游泳实验评价及注意事项51-52
• 2 免疫组化注意事项52-53
• 3 TUNEL注意事项53
• 4 2型糖尿病后抑郁症53-56
• 4.1 2型糖尿病后抑郁的研究状况53-54
• 4.3 2型糖尿病后抑郁的发病机制54-56
• 4.3.1 神经内分泌因素54-55
• 4.3.2 血管因素55
• 4.3.3 社会心理因素55-56
• 5 2型糖尿病后抑郁对大鼠Bad含量变化影响及可能机制56-57
• 5.1 Bad参与细胞凋亡的机制56-57
• 5.1.1 Bad的磷酸化与去磷酸化56
• 5.1.2 Bad的结构变化56
• 5.1.3 Bad与Bax56-57
• 6 2型糖尿病后抑郁对大鼠Bcl-xL含量变化影响及可能机制57-58
• 6.1 Bcl-xL参与细胞凋亡的机制57-58
• 7 2型糖尿病后抑郁与细胞凋亡信号转导58-59
• 8 Bcl-2家族与细胞凋亡59-60
• 9 展望60-61
• 参考文献(References)61-64
• 综述(review)64-72
• 参考文献70-72
• 攻读学位期间发表文章情况72-73
• 致谢73

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前9条

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本文编号：331233