GLT-1依赖的星形胶质细胞源性乳酸介导氯胺酮抗抑郁效应

发布时间：2021-10-18 22:53

　　【研究背景及目的】目前临床上一线抗抑郁药物具有疗效欠佳、起效延迟的缺点。氯胺酮可产生快速持久的抗抑郁效应,但其副作用限制了临床应用。因此,阐明氯胺酮抗抑郁效应神经分子机制对于发现新型快速起效抗抑郁作用靶点具有重要意义。目前氯胺酮抗抑郁效应神经机制研究均围绕神经元为中心展开。本研究从神经元-星形胶质细胞互作的角度,验证了“氯胺酮上调谷氨酸转运体1（Glutamate transporter,GLT-1）依赖的星形胶质细胞源性乳酸生成与释放介导其抗抑郁效应”的科学假说,揭示了氯胺酮抗抑郁效应的新机制。【方法】采用比色法检测脑组织乳酸水平;Elisa法检测脑组织糖原磷酸化酶a（Glycogen phosphorylase a,GPa）水平,以评价GP活性;采用Western Blot检测脑组织星形胶质细胞活化的标志物胶质纤维酸性蛋白（Glial fibrillary acidic protein,GFAP）、GLT-1和GP蛋白表达水平;采用氟代柠檬酸（Fluorocitrate,FC）选择性失活星形胶质细胞;采用L-α-氨基己二酸（L-alpha-aminoadipic acid,L-AA... 

【文章来源】：南华大学湖南省

【文章页数】：91 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

观察氯胺酮对海马乳酸水平与GP活性及GFAP、GLT-1、GP表达水平上调作用的实

南华大学硕士学位论文20程见图2.1。图2.1观察氯胺酮对海马乳酸水平与GP活性及GFAP、GLT-1、GP表达水平上调作用的实验流程图2.10.2观察失活或清除星形胶质细胞对氯胺酮抗抑郁效应的阻断作用(1)观察失活星形胶质细胞对氯胺酮抗抑郁效应的阻断作用大鼠麻醉，行侧脑室置管术，术后恢复1周。恢复期结束后第1天，大鼠行强迫游泳训练15min；第2天行强迫游泳测试(FST)以评价大鼠抑郁样行为，在强迫游泳测试前30min、40min及90min分别注射氯胺酮(10mg/kg，i.p.)、L-乳酸(50nmol/2μl/rat，i.c.v)及星形胶质细胞失活剂FC(1nmol/1μl/rat，i.c.v)或相应溶媒，强迫游泳测试前60min行旷场测试(OFT)以评价大鼠自发活动能力。实验流程见图2.2。图2.2观察失活星形胶质细胞对氯胺酮抗抑郁效应的阻断作用的实验流程图(2)观察清除星形胶质细胞对氯胺酮抗抑郁效应的阻断作用L-AAA具有选择性星形胶质细胞毒性，能剂量与时间依赖的清除星形胶质细胞。低剂量脑内微量注射L-AAA造成快速(2-4小时)短时间内(大约持续72小时)部分星形胶质细胞被选择性清除，随后经过再殖恢复正常[81]。我们首先检测了在星形胶质细胞清除期氯胺酮的抗抑郁效应。大鼠麻醉，行侧脑室置管术，术后恢复1周。恢复期结束后第1-2天，连续两天经侧脑室注射L-AAA(25μg/2

第2章材料和方法21μl/rat)或溶媒，1天1次；第3天，大鼠行强迫游泳训练15min。部分大鼠在强迫游泳训练后24h(第4天)，麻醉、灌流、固定、取脑，行免疫荧光检测海马区星形胶质细胞(GFAP标记)与神经元(NeuN标记)数量。部分大鼠在强迫游泳训练后24h(第4天)，行强迫游泳测试(FST)以评价大鼠抑郁样行为，在强迫游泳测试前30min及40min分别注射氯胺酮(10mg/kg，i.p.)及L-乳酸(50nmol/2μl/rat,i.c.v)或相应溶媒，并在强迫游泳测试前60min，行旷场测试(OFT)以评价大鼠自发活动能力。实验流程见图2.3A。为排除L-AAA可能通过产生非特异性作用影响氯胺酮抗抑郁效应，我们进一步检测了在星形胶质细胞恢复期氯胺酮的抗抑郁效应。大鼠麻醉，行侧脑室置管术，术后恢复1周。恢复期结束后第1-2天，连续两天经侧脑室注射L-AAA(25μg/2μl/rat)或溶媒，1天1次；第8天，大鼠行强迫游泳训练15min。部分大鼠在强迫游泳训练后24h(第9天)，麻醉、灌流、固定、取脑，行免疫荧光检测海马区星形胶质细胞(GFAP标记)与神经元(NeuN标记)数量。部分大鼠在强迫游泳训练后24h(第8天)，行强迫游泳测试(FST)以评价大鼠抑郁样行为，在强迫游泳测试前30min注射氯胺酮(10mg/kg，i.p.)或溶媒，并在强迫游泳测试前60min，行旷场测试(OFT)以评价大鼠自发活动能力。实验流程见图2.3B。图2.3观察清除星形胶质细胞对氯胺酮抗抑郁效应的阻断作用的实验流程图(A)观察星形胶质细胞清除期对氯胺酮抗抑郁效应的影响(左)；(B)观察星形胶质细胞恢复期对氯胺酮抗抑郁效应的影响(右)。2.10.3观察抑制GLT-1对氯胺酮上调海马GP活性与GFAP、GP表达水平及抗抑郁效应的阻断作用大鼠麻醉，行侧脑室置管术，术后恢复1周。恢复期结束后第1天，大鼠行15min强迫游泳训练。部分大鼠在第二天行强迫游泳测试(FST

【参考文献】：
期刊论文
[1]氯胺酮快速抗抑郁作用及机制[J]. 张凯,王国强,赵敏.  中国药物滥用防治杂志. 2018(03)



本文编号：3443654